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《苏州大学》 2007年
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热休克效应对细胞的保护效应

李明  
【摘要】: 目的:本实验的内容主要是对细胞进行热休克预处理,用过氧化氢和加热来研究热休克效应对物理和化学因子引起的细胞损伤的保护效应,指标主要有细胞的存活率和DNA双链断裂率。研究目的为:(1)证实热休克预处理对胚胎细胞是否有保护效应。(2)证实热休克预处理不但可以提高细胞存活率还可以减少细胞DNA的双链断裂。具体内容为:(1)研究热休克预处理对H_2O_2处理后的V79、NIH3T3细胞存活率的变化,观察热休克效应是否可以提高胚胎细胞的存活率。(2)研究热休克处理对细胞DNA双链断裂的影响。(3)研究热休克预处理对高温引起的细胞DNA双链断裂的影响。 方法:实验共分为三个部分:(1)培养NIH3T3和V79细胞,热休克预处理后,采用不同浓度的H_2O_2处理细胞,不同恢复时间后,采用MTT法检测细胞存活率。(2)培养NIH3T3细胞,经37℃、39℃、42℃、43℃、45℃不同热休克预处理温度处理后,多聚甲醛固定,用抗γ-H2AX抗体孵育过夜,再用结合FITC羊-抗-鼠第二抗体室温下标记,激光共聚焦显微镜下观察DNA双链断裂所形成的斑点数量变化。(3)培养V79细胞,不同热休克处理温度和不同恢复时间,不同高温处理后,固定,用抗γ-H2AX抗体孵育过夜,用结合FITC羊-抗-鼠第二抗体室温下标记,激光共聚焦显微镜下观察DNA双链断裂所形成的斑点数量变化。 结果:(1)对于NIH3T3细胞,最好的实验结果是热休克预处理组可以比对照组提高细胞存活率40%左右,对于V79细胞,最好的实验结果是热休克预处理组可以比对照组提高细胞存活率20%左右。不同热休克预处理后恢复时间(大于2小时)对细胞的存活率没有明显影响。(2)细胞经过热休克处理后,立即固定,用激光共聚焦显微镜观察细胞:有多少DNA双链断裂点就可以在细胞中观察到多少亮点,对照组有斑点细胞数小于细胞总数的5%。45℃条件下预处理后,在激光共聚焦显微镜下则可以观察到所有细胞核中都有因DNA双链断裂而形成的斑点。39℃处理的细胞,核内双链断裂的斑点无明显增多,有斑点的细胞数有少量增多。42℃处理的细胞有双链断裂斑点的细胞数和细胞核内斑点增加不明显,但经过43℃处理的细胞,细胞核中有双链断裂的斑点的细胞和细胞核中的斑点数量都有显著的增多。(3)细胞采用不同高温,不同热休克处理温度,不同恢复时间处理后,结果发现41℃热休克预处理1小时可以显著减少DNA双链断裂的量,为最佳热休克处理条件。不同热休克预处理温度对细胞双链断裂的影响有显著性差异,但不同恢复时间处理的细胞之间并未检测到显著性差异。 结论:对细胞进行42℃以下温度热休克处理,可以提高细胞对高温和大剂量H_2O_2的耐受能力,提高细胞的存活率和减少细胞DNA的双链断裂量,说明热休克预处理能起到保护细胞的作用,不但可以提高细胞存活率还可以减少细胞DNA的双链断裂。且以41℃热休克预处理1h为最佳预处理条件,对细胞的保护效应最好。证实热休克预处理不但可以提高细胞存活率还可以减少DNA的双链断裂。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q25

【参考文献】
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