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《苏州大学》 2007年
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家蚕泛素基因的多态性与野蚕泛素基因的克隆及原核表达

陈正凯  
【摘要】: 泛素(Ubiquitin)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链,由于其广泛分布于各类细胞中而被称遍在蛋白。其相对分子质量约为8.6 kDa,从不同种属的真核生物中得到的泛素一级结构几乎相同。目前已知泛素主要是通过泛素-蛋白酶体途径高效并高度选择性地对细胞质和细胞核内的蛋白尤其是短命蛋白等进行降解。许多鳞翅目昆虫在变态过程中,短期内不仅要合成新蛋白质,还要降解异常的、旧的蛋白质,这样才能使生命体保持平衡。野桑蚕和其它鳞翅目昆虫有相近的生态习性,其体内蛋白质的代谢途径极其复杂。因此,野蚕泛素基因及其表达的研究对了解昆虫的蛋白质代谢途径具有一定的指导意义。 许多昆虫的泛素蛋白都是由泛素基因家族(UBI1、UBI2、UBI3、UBI4)编码的。本研究从家蚕基因库中发现了1条可同时编码15个单体泛素的DNA序列(No.AADK01019318),这15个单体泛素基因虽然在碱基水平上的一定差异,但在氨基酸水平上是保守的。用野蚕基因组DNA作模板,泛素基因得到了扩增,表明泛素基因内部没有内含子插入。以野桑蚕体壁细胞的cDNA为模板,利用PCR技术扩增了单体泛素基因的编码区,该序列提交GenBank,登录号DQ839401。序列分析表明,该编码区的长度为231 bp,编码76个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量约为8.6 kDa,等电点为5.73。同源性比较发现,野桑蚕泛素基因与其他真核生物泛素基因在核苷酸水平上有83%同源性,在氨基酸水平上具有94%以上的相似性。将野桑蚕泛素基因片段与pGEX-4T-2连接,构建原核表达载体pGEX/ubi,重组载体转化大肠杆菌BL_(21)后在37℃及30℃的培养条件下,泛素基因得到了高效表达。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S881

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