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《苏州大学》 2007年
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大鼠脑外伤后自噬/溶酶体途径相关蛋白表达的研究

张延波  
【摘要】: 目的:研究自噬/溶酶体途径在脑外伤后激活情况,并对其在神经损伤修复中的作用进行探讨。 方法:采用自由落体法建立大鼠脑外伤(traumatic brain injury,TBI)模型,透射电镜法观测损伤区及其周边区(皮层与海马)神经元中自噬体的形成情况,免疫组化及免疫印记法检测损伤区及其周边区(皮层与海马)自噬/溶酶体途径相关蛋白cathepsin-B、cathepsin-D、LC3以及Beclin1的表达。免疫荧光双标及激光共聚焦法检测损伤区及其周边区(皮层与海马)cathepsin-B、cathepsin-D、LC3以及Beclin1阳性细胞与caspase-3阳性细胞的共表达情况。 结果:透射电镜显示大鼠脑外伤后1h即见到损伤及周边区神经元内自噬体形成,4d-8d出现最为明显,一直持续到32d。免疫印记及免疫组化结果显示,脑外伤后1h cathepsin-B表达增加(P<0.05),8d达高峰,32d仍有较多表达(P<0.05);脑外伤后12h cathepsin-D表达增加(P<0.05),8d达高峰,32d仍有较多表达(P<0.05);脑外伤后1h LC3、Beclin1表达增加(P<0.05),均于8d达高峰,32d仍有较多表达(P<0.05)。免疫荧光双标结果显示,脑外伤初期,cathepsin-B和-D阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少,脑外伤后6h开始增加,32d仍然有很多阳性细胞重叠;脑外伤初期,LC3和Beclin1阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少,脑外伤后24h开始增加,32d仍然有较多阳性细胞重叠。 结论:1.大鼠脑外伤后自噬被激活。2.大鼠脑外伤后溶酶体酶激活。其激活在脑外伤早期可能抑制细胞凋亡执行因子caspase-3的激活,之后(6h后)则与caspase-3起协同作用,共同促进细胞死亡。3.在脑外伤后修复过程中,自噬对一些神经细胞起持续性保护作用,这种作用在脑外伤初期尤为明显;在脑外伤中晚期则可能参与促进神经细胞死亡过程。4.自噬和凋亡促进了溶酶体酶的活化及次级溶酶体形成。5.LC3、Beclin1、cathepsin-B和-D表达的时程变化对脑外伤的存在具有法医学诊断意义,同时有利于对中晚期脑外伤形成时间的推断。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:D919

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