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《苏州大学》 2007年
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血管性血友病分型组合实验的建立和临床应用

徐海燕  
【摘要】: 目的:(1)建立表达重组糖蛋白Iba活性片段(rGPIba H1-V289)细胞株,并且纯化其表达产物,研究其生物学功能。(2)通过rGPIba表达产物建立一种新的检测VWF:RCO的酶联免疫吸附(ELISA)方法,并探讨其在血管性血友病诊断中的应用价值。(3)比较VWF在正常人组不同ABO血型个体间质和量的差异。(4)建立一套系统的检测VWD的诊断和分型组合实验方法,为VWD的诊断和分型提供更准确的实验室依据。 方法:(1)利用脂质体将含有编码GPIba H1-V289 DNA质粒pCMV3转染CHO细胞,用亲和层析法纯化重组片段。(2)以抗GPIba的单克隆抗体2D4-IgG为包被抗体捕获r GPIba,建立VWF:RCO-ELISA法。同时对其敏感性、重复性作方法学评估,并与血小板凝聚法检测VWF:RCO进行比较。(3)采用ELISA法检测正常人组(不同ABO血型)、VWD组及其它出血性疾病组血浆VWF:Ag、VWF:CB、VWF:RCO、VWF:FVⅢB,采用智能血液凝集仪检测RIPA水平,采用非连续缓冲体系的琼脂糖凝胶电泳进行VWF多聚物分析。 结果:(1)经转染的CHO细胞培养上清含有高表达的rGPIba,纯化重组片段能抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能。(2)运用ELISA法检测VWF:RCO,VWD患者组与正常人组比较,差异有统计学意义(P=0.0001);其它出血性疾病组与正常组比较,差异无统计学差异(P>0.05),该法测定的批内和批间变异分别为5.4%和9.4%。血小板凝聚法检测VWF:RCO其批内和批间变异分别为17.8%和18.3%。(3)O型血个体其VWF:Ag、VWF:RCO及VWF:CB均低于非O型血,差异有显著统计学意义(P<0.001)。(4)我们采用PLT和APTT作为VWD的筛选试验,VWF:Ag、VWF:CB和VWF:RCO-ELISA为确诊试验,RIPA、VWF-FVⅢB和多聚物分析为分型试验。 结论:(1)CHO细胞株能恒定表达rGPIbaH1-V289,重组片段具有较高的纯度、免疫学活性和生物学活性。(2)VWF:RCO-ELISA法操作简便,特异性、敏感性和重复性均较好;通过VWF:RCO/Ag可以鉴别1型、2型及3型血管性血友病(VWD)患者。(3)O型血较非O型血个体有更高的出血倾向,在临床诊断VWD的过程中要充分考虑ABO血型系统对血浆VWF水平的影响。(4)本研究所建立的检测方法和优化组合适合大多数VWD患者的诊断和分型需要,对VWD患者的诊断、治疗和预后有重要意义。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R55

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【参考文献】
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