收藏本站
《苏州大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

内吗啡肽和Mu阿片受体在小鼠树突状细胞的表达及其相关功能的研究

李正红  
【摘要】: 目的:研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2以及Mu阿片受体在小鼠树突状细胞的表达及其相关的功能。 方法:从7-8周龄的C57BL/6J小鼠骨髓提取骨髓前体细胞培养,经CD11c免疫磁珠分选,获得纯化的树突状细胞。流式细胞仪分析表明,CD11c(树突状细胞的特异性标记)阳性细胞纯度达95%以上。首先,研究Mu阿片受体是否在鼠树突状细胞表达。用RT-PCR的方法,检测Mu阿片受体基因在树突状细胞上的表达;用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光染色,观察Mu阿片受体蛋白在树突状细胞上的表达;同时,用定量PCR的方法,研究了不同Toll样受体(TLR)的配体对Mu阿片受体基因表达的调控。其次,研究树突状细胞是否产生内吗啡肽-1和内吗啡肽-2。用免疫荧光染色研究了内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在树突状细胞的表达;用酶免疫测定(EIA)的方法,检测了培养树突状细胞的上清中的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2的含量,反映内吗啡肽从树突状细胞的分泌。最后,在证实了树突状细胞表达内吗啡肽-1、内吗啡肽-2和Mu阿片受体的基础上,进一步探讨树突状细胞内吗啡肽/Mu阿片受体的功能意义。用脂多糖(LPS)激活树突状细胞,用naloxone作为阿片受体非特异性拮抗剂,用CTOP作为Mu阿片受体特异性拮抗剂,用竞争结合的方法检测了树突状细胞内由forskolin引起的cAMP的生成;用Western blot的方法,观察了内吗啡肽-1对树突状细胞内磷酸化p38 MAPK和ERK的表达,以判断p38 MAPK和ERK两条信号通路的活化状态;运用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法,检测了内吗啡肽-1促使树突状细胞分泌的细胞因子IL-10、IL-12和IL-23的浓度;在树突状细胞和T淋巴细胞共培养的条件下,用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入测定的方法检测了T淋巴细胞的增殖能力。 结果:在Mu阿片受体方面,RT-PCR的结果表明,经LPS活化的树突状细胞表达Mu阿片受体的mRNA。免疫荧光双标染色的结果表明,Mu阿片受体蛋白与树突状细胞的CD11c分子共表达于细胞膜上;而且,定量PCR的结果表明,不同的TLR配体均可显著上调Mu阿片受体基因的表达,特别是LPS和Poly (I:C)上调更为明显;LPS活化的树突状细胞在6小时后便出现Mu阿片受体mRNA的表达,表达水平逐步升高,于24小时达到顶峰,并在随后的12-24小时内维持在较高的表达水平。在内吗啡肽方面,免疫荧光染色表明,活化的树突状细胞内产生内吗啡肽-1和内吗啡肽-2;酶免疫测定(EIA)检测的结果表明,不同的TLR配体活化树突状细胞促使分泌不同浓度的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2。对内吗啡肽/Mu阿片受体在树突状细胞的功能研究表明,内吗啡肽-1可显著降低胞内forskolin引起的cAMP的生成;能降低p38MAPK信号通路的活化,增加ERK信号通路的活化;相应地,经过内吗啡肽-1处理的LPS活化的树突状细胞,增强IL-10的产生和分泌,降低IL-12和IL-23的产生和分泌;与T淋巴细胞体外共培养时,经内吗啡肽-1或内吗啡肽-2处理的树突状细胞能抑制T淋巴细胞的增殖反应。上述内吗啡肽的作用都能被阿片受体非特异性拮抗剂naloxone和Mu阿片受体特异性拮抗剂CTOP翻转或部分翻转,提示内吗啡肽的作用都是由Mu受体介导的。 结论:活化的树突状细胞诱导性表达Mu阿片受体和内吗啡肽。内吗啡肽可通过Mu阿片受体影响胞内的信号通路,改变树突状细胞的功能特性,调节免疫反应。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R96

手机知网App
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 张庆余;范晓娜;曹毅;;正常猕猴与树鼩神经系统和免疫系统组织中大麻素与阿片受体的表达[J];动物学研究;2011年01期
2 段丽君;杨永秀;毕海霞;张蕾;柴红霞;;内吗啡肽在子宫内膜异位症大鼠模型中的分布及意义[J];中国妇产科临床杂志;2007年03期
3 刘江月,唐瑛,王占聚,崔为发;阿片样物质在免疫造血系统中的作用[J];国际病理科学与临床杂志;2005年04期
4 李正红;高琴;叶红伟;单立冬;龚珊;蒋星红;;内吗啡肽在小鼠树突状细胞的诱导表达[J];中国药理学通报;2011年01期
5 李正红;于影;杨锐;方迎艳;杨丽娟;高琴;;内吗啡肽对小鼠树突状细胞免疫功能的影响[J];中国药理学通报;2011年07期
6 王晶;陈涛;万信念;李云霄;焦良波;胡卫;;阿片受体-阿片肽的免疫镇痛作用[J];中国疼痛医学杂志;2013年12期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 高艳锋;二聚化以及侧链和碳末端修饰的内吗啡肽类似物的构效关系研究[D];兰州大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 贾彬;不同麻醉药物及经皮穴位电刺激对皮肤强啡肽和κ受体表达影响[D];广州中医药大学;2011年
2 刘雪锋;组合化学修饰内吗啡肽-1类似物的合成和药理学活性研究[D];兰州大学;2007年
3 郭超;Ⅰ型糖尿病改变了内吗啡肽对小鼠结肠收缩特性的影响[D];兰州大学;2009年
4 路海;吗啡持续刺激对小鼠树突状细胞成熟和阿片受体表达的影响[D];泰山医学院;2009年
5 赵瑞飞;多位点修饰内吗啡肽及其类似物的构效关系研究[D];兰州大学;2010年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 于益芝;王建莉;曹雪涛;;树突状细胞分化发育的研究进展[J];国外医学(免疫学分册);1998年06期
2 常凌爱,路士华,杨莉;树突状细胞在免疫学中的作用[J];邯郸医学高等专科学校学报;1999年01期
3 刘恩梅,罗嘉慧,涂文伟,刘宇隆;胰岛素样生长因子1诱导脐血CD14~+单核细胞转化树突状细胞分化成熟的研究[J];中华儿科杂志;2001年11期
4 刘福生,王忠诚,历俊华,林松,任铭,肖庆,张亚卓;肿瘤抗原致敏树突状细胞瘤苗治疗颅内胶质瘤的实验研究[J];中华神经外科杂志;2002年02期
5 刘美娜;树突状细胞与妇科肿瘤生物治疗[J];国外医学.妇产科学分册;2002年06期
6 吴军,王捷,杨太成,赖晃文,郑文岭,王晓怀;钙离子载体对外周血单核细胞来源的树突状细胞的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;2003年01期
7 徐敏,程书榜,王成友,郑凯;胃癌微环境中树突状细胞浸润的临床意义[J];中华胃肠外科杂志;2003年05期
8 杨吉伟;;人外周血树突状细胞体外培养与扩增的研究进展[J];国外医学.老年医学分册;2003年02期
9 练诗梅,王晓波,薛祖光,张旗,孙健,荒木弘一;脐血来源树突状细胞的体外诱导及扩增[J];中国实验血液学杂志;2004年05期
10 黎阳,包蓉,黄绍良,吴燕峰,魏菁,周敦华;诱导脐血单个核细胞分化为树突状细胞的实验研究[J];中国当代儿科杂志;2004年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度树突状细胞培养鉴定[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年
2 张庆红;胡玉珍;吕顺艳;钟延清;;雌激素影响大鼠树突状细胞的分化、成熟和功能[A];中国生理学会第六届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2003年
3 郭大伟;梁健;姜晓峰;王学范;魏云涛;姜洪磊;;GPC3基因转染的树突状细胞诱导抗肝癌HepG2细胞杀伤作用的研究[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年
4 张新华;钟翠平;顾云娣;顾晓;范强;王国强;周播江;;TGF-β1基因转染树突状细胞增强移植心脏耐受性并降低Fractalkine的表达[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
5 于益芝;刘书逊;王文雅;张明徽;郭振红;徐红梅;齐润姿;安华章;曹雪涛;;TRAIL在树突状细胞杀伤活化T细胞中的作用[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
6 尤长宣;罗荣城;张军一;苏瑾;廖旺军;郑航;Paul L Hermonat;;基因转移制备树突状细胞的实验研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
7 葛长勇;李鸿钧;孙茂盛;冯婷婷;靳昌忠;姚航平;吴南屏;;灭活SV40致敏的猴树突状细胞的生物学特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年
8 葛长勇;李鸿钧;谢天宏;张光明;易山;孙茂盛;吴南屏;;恒河猴树突状细胞的生物学特性研究[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年
9 张尧;靳风烁;兰卫华;李彦峰;张克勤;吴刚;叶锦;;联合应用塞莱西布和CpG-ODN对树突状细胞功能的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
10 夏强;刘卫彬;陈振光;张莹;黄如训;;胸腺成熟树突状细胞与重症肌无力发生的相关性分析[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王雪飞;树突状细胞“面目”更清晰[N];健康报;2004年
2 章静波;干细胞研究新动向[N];健康报;2009年
3 记者 白毅;间充质干细胞可促进成熟树突状细胞增殖分化[N];中国医药报;2009年
4 方彤;树突状细胞瘤苗新进展[N];健康报;2006年
5 本报记者 沈湫莎;这一次,诺奖会不会颁给逝者[N];文汇报;2011年
6 张献怀;树突状细胞疗法治疗恶性黑色素瘤[N];中国医药报;2004年
7 记者 毛黎;美发现一种“超级”形态酶[N];科技日报;2006年
8 杨淑娟;美研究出新型丙型肝炎疫苗[N];中国医药报;2006年
9 ;慢性HBV感染使树突状细胞功能受损[N];中国医药报;2006年
10 章米力;瑞金医院乙肝发病机制研究获进展[N];健康报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 潘建平;γ-干扰素对树突状细胞分化和功能成熟的调控及其基因修饰的树突状细胞抗肿瘤免疫机制研究[D];浙江大学;2002年
2 朱伟国;PPAR-γ激动剂吡格列酮抑制血管紧张素Ⅱ诱导树突状细胞免疫激活致动脉粥样硬化斑块不稳定的研究[D];浙江大学;2010年
3 王正昕;肿瘤微环境中浸润性树突状细胞的表型和免疫学功能的研究及其临床意义[D];第二军医大学;2000年
4 周向阳;新型热休克蛋白HSP-DC激活树突状细胞及其佐剂效应研究[D];第二军医大学;2003年
5 赵鸿;未成熟树突状细胞联合骨髓移植诱导大鼠异体肾移植免疫耐受的研究[D];复旦大学;2003年
6 陈玉丙;树突状细胞抗原负载及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大学;2004年
7 王宏伟;肺间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的免疫激活与免疫耐受作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
8 赵毅;青藤碱对RA患者树突状细胞免疫功能的影响及机制研究[D];第一军医大学;2007年
9 刘海波;Fas信号激活树突状细胞炎性复合体形成的生物学意义与分子机制研究[D];第二军医大学;2010年
10 赵娟;受者来源的PIR-B转染的树突状细胞对小鼠异基因骨髓移植GVHD的保护作用[D];华中科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴鸣宇;黑色素瘤基因(MAGE-1)相关肽负载树突状细胞对肝癌细胞杀伤作用的实验研究[D];苏州大学;2003年
2 孟冬梅;急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究[D];青岛大学;2003年
3 梁军利;IFN-β1a对多发性硬化树突状细胞分泌的细胞因子影响的研究[D];广西医科大学;2010年
4 黄祺琦;耐受性树突状细胞来源的exosome治疗小鼠免疫介导性再生障碍性贫血的实验研究[D];南昌大学;2010年
5 初晓霞;淋巴瘤树突状细胞的表达与临床分期、恶性度及预后的相关性研究[D];青岛大学;2002年
6 刘丽燕;MyD88在OK-432诱导树突状细胞成熟中的作用[D];福建医科大学;2010年
7 郭佳;TLR配体诱导骨髓来源树突状细胞获得产生全反式维甲酸的能力[D];浙江大学;2011年
8 才志刚;冻融抗原冲击致敏的树突状细胞诱导产生肺癌特异性免疫应答的实验研究[D];第二军医大学;2004年
9 李静;癌—睾丸抗原OY-TES-1致敏树突状细胞的体外抗肝癌研究[D];广西医科大学;2011年
10 吴军;树突状细胞(DC)的培养及CEA-重组痘苗病毒转染DC诱导的特异性T细胞免疫[D];第一军医大学;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026