收藏本站
《苏州大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学行为的影响

商江峰  
【摘要】: 第一部分川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖及凋亡的影响 乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,全世界每年约有120万妇女罹患乳腺癌,占所有女性恶性肿瘤的18%。传统的化学药物治疗,效果明显,副作用严重。寻找一种理想的药物成为近来关注的热点。川芎嗪是由中药伞形科植物的根茎提取的有效成分,逆转肿瘤多药耐药及抗肿瘤已经在许多的研究中得到证实。但川芎嗪对乳腺癌细胞增殖及侵袭的研究未见报道。本部分研究以体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,观察川芎嗪对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。 方法 1、MTT法检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞增殖的作用: 设0.25mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL、1.50mg/mL、2.00mg/mL川芎嗪干预组,对照组仅加等量的培养液,各浓度复5孔。每隔2d更换含同样药物浓度的新鲜培养液,分别培养24h、48h、72h,加入MTT继续孵育4h后,酶标仪测570nm吸光度(A)值。实验重复2次,细胞增殖抑制率=(对照组A值-处理组A值)/对照组A值×100%。 2、PI单染流式细胞仪检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞周期的影响: 设对照组及0.50mg/mL、1.00mg/mL、1.50mg/mL川芎嗪干预组。药物作用48h后收集细胞,离心,重悬,PBS洗涤,RNA酶处理,加入400μL PI,室温反应30min。计算机软件分析细胞周期的分布。实验重复3次。 3、Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞凋亡的影响: 设对照组及0.50mg/mL, 1.00mg/mL和1.50mg/mL川芎嗪干预组。药物作用48h后收集细胞,取100μL细胞悬液于流式管中,加入Annexin-Ⅴ-FITC和PI各5μL,冰浴避光孵育10min后在流式细胞仪上测定。实验重复3次。 4、细胞形态观察 设对照组及0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL川芎嗪干预组,药物作用48h后直接在倒置显微镜下观察细胞形态,然后收集细胞,用2.5%的戊二醛固定2h,固定脱水包埋后,透射电镜下观察细胞超微结构。 5、统计学处理 数据以X±S表示。应用SPSS17.0统计软件进行方差分析。显著性检验水平为α=0.05。 结果 1、川芎嗪对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用 川芎嗪在一定浓度范围(≥0.5mg/ml)能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,且其增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性。较低浓度(≤0.25mg/ml)对MDA-MB-231细胞的抑制作用不明显,即使作用时间延长,抑制也不明显。 2、流式细胞仪检测结果 川芎嗪能使S期肿瘤细胞比例减少,G0/G1期肿瘤细胞比例增加,而且在G0/G1期被阻滞的肿瘤细胞数随着川芎嗪浓度增加而增多。随着川芎嗪浓度(0.50mg/mL~1.50mg/mL)的增加,凋亡的MDA-MB-231细胞增多,其作用呈浓度依赖性。 3、川芎嗪作用前后细胞形态学的改变 光及电镜均观察到川芎嗪作用后MDA-MB-231细胞的凋亡现象,随着浓度(0.50mg/mL~2.00mg/mL)的增加,贴壁及粘附的细胞数目减少。1.0mg/ml时,胞浆内可见明显的空泡样变。 结论 1、川芎嗪能抑制MDA-MB-231细胞的体外增殖,在一定的浓度范围内(≥0.50mg/ml),其抑制作用随着时间和浓度的增加表现出时效和量效关系。 2、川芎嗪阻滞MDA-MB-231细胞周期于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,表现出浓度依赖性。 3、川芎嗪可能通过阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制乳腺癌细胞的增殖并诱导凋亡。 第二部分川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞侵袭、黏附的影响 第一部分的研究证明,川芎嗪可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖并诱导凋亡,而侵袭、黏附行为也是肿瘤细胞的重要特征,参与了肿瘤的复发转移。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)通过降解细胞外基质及基底膜,促进肿瘤向远处转移。本部分实验以MDA-MB-231细胞为研究对象,观察不同浓度川芎嗪干预后乳腺癌细胞侵袭、黏附能力的改变及MMP-2/MMP-9的表达,探讨川芎嗪抑制乳腺癌细胞侵袭、黏附的作用机制。 方法 1、细胞黏附实验 96孔板每孔铺Matrigel凝胶30μl,2% BSA 20μl封板。收集不同浓度川芎嗪干预满24h的MDA-MB-231细胞,以5×104/ml接种到96孔板上,设对照组及0.50mg/mL、0.75mg/mL、1.00mg/mL川芎嗪干预组,各组复4孔。37℃培养1h后,PBS洗去未黏附细胞,加入MTT继续孵育4h后,酶标仪测570nm吸光度(A)值。实验重复3次。细胞黏附抑制率=(对照组A值-处理组A值)/对照组A值×100%。 2、Transwell侵袭实验 Transwell小室底部铺上Matrigel凝胶100μl,置于24孔板内。收集MDA-MB-231细胞以无血清RPMI1640制成2×105/ml单细胞悬液,取100μl移入小室,设对照组及0.50 mg/mL、0.75mg/mL、1.00mg/mL川芎嗪干预组,各组复3孔。孵育24h后以棉签小心刮除滤膜上室面的细胞,固定后在400倍高倍显微镜下计数。侵袭细胞数=各下室面黏附的细胞数+相应24孔板黏附的细胞数,细胞侵袭抑制率=(对照组侵袭细胞数-处理组侵袭细胞数)/对照组侵袭细胞数×100%。 3、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测MMP-2/MMP-9的表达 设对照组及0.50 mg/mL、0.75mg/mL、1.00mg/mL川芎嗪干预组。药物作用24h后收集细胞。抽提细胞总RNA,进行逆转录和PCR扩增;MMP-2扩增35个循环,其扩增片段长度为346bp;MMP-9扩增35个循环,其循环片段长度为214bp;以β-actin为内参照,扩增35个循环,其扩增片段长度为474bp。实验重复2次。 4、统计学处理 数据以X±S表示。应用SPSS17.0统计软件进行方差分析。显著性检验水平为α=0.05。 结果 1、川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力的抑制作用 与对照组相比,各实验组培养细胞黏附Matrigel凝胶的能力明显降低,其抑制率分别为16.65±3.16%、35.17±2.20%、57.97±2.29%。川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力的抑制作用呈剂量依赖性。 2、川芎嗪对MDA-MB-231细胞侵袭力的抑制作用 0.50 mg/mL、0.75mg/mL、1.00mg/mL川芎嗪对MDA-MB-231细胞的侵袭抑制率分别为24.65±3.11%、41.64±3.52%、53.75±2.64%,与对照组相比,各浓度川芎嗪干预组侵袭细胞数均明显减少,且川芎嗪干预组组间差异显著。 3、川芎嗪对MDA-MB-231细胞MMP-2/MMP-9表达的抑制作用 对照组和各川芎嗪干预组的MMP-2/β-actin光密度比值分别为1.08±0.04、0.89±0.04、0.64±0.10、0.45±0.12。与对照组比较,川芎嗪各浓度组MMP-2 mRNA表达量均显著降低,而且随着川芎嗪浓度的增加,川芎嗪的抑制作用具有明显的剂量依赖性。MMP-9mRNA表达量未见明显变化。 结论 1、体外研究表明川芎嗪能显著抑制MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭能力,其抑制效应与药物的浓度呈正相关。 2、川芎嗪能下调MDA-MB-231细胞MMP-2 mRNA的表达,并且在一定的剂量范围内,表现出剂量依赖性;川芎嗪对MMP-9mRNA的表达未见明显影响。 3、川芎嗪可能通过下调MDA-MB-231细胞MMP-2mRNA的表达而抑制细胞的黏附、侵袭能力。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285.5;R737.9

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 戈继业,张振岭;川芎药理作用研究及临床应用新进展[J];中国中西医结合杂志;1994年10期
2 刘明松,惠增环,赵景波,阎培泉,孔繁梅;慢性肺原性心脏病急性发作期64例加用川芎嗪治疗的疗效[J];中国新药与临床杂志;1995年02期
3 张连元,张之玮,董淑云,张硕森,景有伶,门秀丽;川芎嗪的抗创伤性休克发生的作用[J];中国药理学通报;1995年05期
4 许国忠,孙宝春,王俊科,吕黄已,熊君宇,盛卓人;川芎嗪对血小板保护的研究[J];中华麻醉学杂志;1995年05期
5 王良兴,邢玲玲,陈少贤,吴兰豹, 胡国新,陈醒言;川芎嗪对组胺和乙酰胆碱所致离体豚鼠气管条收缩作用的影响[J];温州医学院学报;1995年03期
6 钟巧易,周汉昭;川芎嗪治疗小儿原发性肾病综合征近期疗效观察[J];湖南中医学院学报;1996年03期
7 王万铁,李东;川芎嗪对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J];基础医学与临床;1997年04期
8 王宝善,李若鸿;川芎嗪治疗乙型肝炎高度黄疸的临床观察[J];辽宁中医杂志;1997年12期
9 刘毅,孟凡秀,王允彦,刘刚,赵秀尧,朱建民,陈献春,陈福令,寇玉相;川芎嗪在显微外科的临床应用研究[J];济宁医学院学报;1998年03期
10 陈洁文,汤湘江,万文成;川芎嗪对大鼠脑急性缺血缺氧损伤的保护作用[J];广州中医药大学学报;1998年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨奎;周明眉;姜远平;唐灿;王一涛;;川芎嗪、阿魏酸对血小板释放5-HT的影响[A];第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会会议论文集[C];2002年
2 许琼;高鑫;;川芎嗪改善大鼠内皮细胞功能及抗氧化活性机制研究[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
3 李孝生;王文丽;陈爽;;川芎嗪对肝星状细胞增殖及CTGF、MMP13、TIMP1表达的影响[A];第二十次全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2008年
4 金可可;王万铁;邱晓晓;毛朝鸣;潘雪蓉;;川芎嗪对肾缺血/再灌注家兔心功能的改善作用[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年
5 曹灵;孙兴旺;张瑶;程鹏;张燕;盛梅;;Bax/Bcl-2及WT-1在膜性肾病大鼠肾组织中的表达及川芎嗪对其的影响[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
6 杨光田;李树生;邓普珍;王迪浔;余上斌;;实验动物复苏及缺氧时川芎嗪对心脑的作用[A];中华医学会急诊医学学会第六次全国急诊医学学术会议论文汇编[C];1996年
7 阳飞昆;潘銮凤;施永德;王建民;ARTMANN Gerhard;;川芎嗪对H_2O_2诱导的红细胞-内皮细胞黏附性的影响[A];全国第九届生物力学和流变学学术会议论文集[C];2001年
8 唐振国;丁胜元;周乐全;罗荣敬;;川芎嗪对全脑缺血BKCa通道的影响[A];中南地区第六届生理学学术会议论文摘要汇编[C];2004年
9 金正勇;马国哲;池永学;;川芎嗪对高氧肺损伤的影响[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
10 吴建平;沈世忠;杨忠民;胡义阳;施子诺;;川芎嗪对不卧床连续性腹膜透析透析效能的影响[A];第六届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐伶;川芎嗪可用于治疗突发性耳聋[N];中国医药报;2005年
2 陶春祥;川芎嗪的临床应用[N];中国中医药报;2003年
3 记者 王华锋;川芎嗪具有钙拮抗作用[N];中国医药报;2006年
4 徐晓玉;杨丽蓉;陈刚;川芎嗪能抑制ECV304增殖[N];中国医药报;2005年
5 单文华;川芎嗪的临床新用[N];农村医药报(汉);2004年
6 ;川芎嗪有减轻急性癫痫脑损伤的作用[N];中国中医药报;2004年
7 程书权;川芎嗪临床新用[N];中国中医药报;2001年
8 卞慕唐 王小焕;关于川芎嗪命名的异议[N];中国中医药报;2003年
9 冯世容;川芎嗪能促视网膜神经生长[N];中国医药报;2000年
10 程书权;川芎嗪的临床新用[N];中国医药报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘星言;川芎嗪醇质体控释贴片的研究[D];中南大学;2009年
2 杨澄;川芎嗪治疗严重脓毒症心肌损伤作用及其抗氧化机制研究[D];广州中医药大学;2011年
3 于妍;川芎嗪、黄芪液和参附液抑制心肌肥大及对线粒体和能量代谢的影响[D];北京中医药大学;2012年
4 许琼;川芎嗪改善高葡萄糖诱导的内皮细胞功能损伤机制研究[D];复旦大学;2012年
5 陈哲;川芎嗪在土三七诱导的小鼠肝小静脉闭塞病中的防治作用及机制探讨[D];中南大学;2011年
6 郑春燕;COX-2介导川芎嗪抑制肺癌A549细胞侵袭转移的作用研究[D];山东大学;2012年
7 刘渝溪;1、格木内生真菌次生代谢产物的研究2、中药川芎和山楂的药效物质基础研究[D];北京协和医学院;2010年
8 王宏芳;CRAd.pEgr1-Smac联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应[D];吉林大学;2011年
9 王鹏;川芎嗪结构修饰及生物活性测定甘氨酸茶碱纳缓释片不对称给药的药代动力学研究[D];沈阳药科大学;2003年
10 林亚洲;充血性心力衰竭时心房颤动发生维持的基质及川芎嗪干预的分子基础[D];福建中医学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 商江峰;川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学行为的影响[D];苏州大学;2010年
2 郭君红;川芎嗪防治家兔微血管吻合术后血栓形成的实验研究[D];湖北中医学院;2003年
3 焦东东;川芎嗪对腹主动脉缩窄大鼠心肌AT1受体和血浆醛固酮的影响[D];南方医科大学;2010年
4 吴昊;川芎嗪对人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)氯化钴诱导缺氧后纤溶功能的影响[D];南京医科大学;2010年
5 华睿;川芎嗪对豚鼠心室肌细胞离子电流的作用[D];郑州大学;2002年
6 简讯;川芎嗪治疗原发性肾病综合征——循证评价[D];四川大学;2003年
7 王增欣;川芎嗪对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠MMPs表达的影响[D];河北大学;2011年
8 李玉冰;丹参酮Ⅱa、川芎嗪联合体外诱导BMSCs分化为心肌样细胞的研究[D];湖南中医药大学;2011年
9 戴儒丽;川芎嗪对骨髓间质干细胞增殖、SDF-1mRNA表达及向心肌样细胞分化的实验研究[D];广州中医药大学;2010年
10 林淑仪;苦参碱、川芎嗪抑制低氧培养后白血病细胞侵袭转移作用的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026