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《苏州大学》 2010年
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维生素D抗感染作用的研究

郝莉  
【摘要】: 目的:本课题主要分四个部分,从体内、体外研究维生素D对感染免疫的调节作用。一、采用小鼠单核巨噬细胞株-RAW264.7,研究1,25-二羟维生素D(1,25(OH)2D3)对LPS刺激后的巨噬细胞功能和自身凋亡的影响;二、采用小鼠单核巨噬细胞株-RAW264.7,研究1,25(OH)2D3对感染金黄色葡萄球菌后巨噬细胞吞噬活性、活性氧生成、及自身凋亡的影响;三、采用C57/BL小鼠,研究1,25(OH)2D3对LPS诱导的急性肺损伤、小鼠体内炎症因子释放、肺水肿以及小鼠感染性休克发生后小鼠生存时间的影响;四、采用病例对照研究的方法研究机体内维生素D代谢物水平与糖尿病患者肺部感染之间的关系。 方法:一、巨噬细胞补充1,25(OH)2D3 24h后,用流式细胞仪检测细菌脂多糖LPS诱导后巨噬细胞活性氧生成、凋亡率、线粒体跨膜电位和胞内游离钙离子浓度的变化;二、巨噬细胞补充1,25(OH)2D3 24h后,用流式细胞仪检测金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus Rosenbach,SA)感染后巨噬细胞吞菌活性、活性氧生成、线粒体跨膜电位和胞内游离钙离子浓度的变化;三、C57/BL小鼠皮下注射1,25(OH)2D3一周后,分别以不同剂量的LPS感染建立急性肺损伤和感染性休克动物模型,ELISA法检测小鼠血清、心肌和肺组织匀浆中TNF-α的含量,肺组织湿重/干重(W/D)法检测肺水肿程度,并对发生感染性休克小鼠的生存时间进行生存分析;四、以糖尿病并发肺部感染为研究群体,通过病例对照的方法研究血清中维生素D代谢物水平与肺部感染之间的关系。 结果:一、LPS诱导实验结果显示,补充1,25(OH)2D3组巨噬细胞凋亡率明显降低(P0.05);线粒体膜电位在1h、3h时明显偏高(P0.01);胞内钙离子浓度偏低但无统计学差异;释放的活性氧量在3h明显增高(P0.05),1h、6h时明显偏低(P0.01),并且膜电位与凋亡率、钙离子浓度之间活性氧存在良好的相关性。二、金葡感染实验结果显示,补充1,25(OH)2D3组巨噬细胞的吞噬活性1h明显增强(P0.01),6h明显降低(P0.01);活性氧释放量1h显著升高(P0.01),3h、6h显著降低(P0.01);线粒体膜电位1h显著降低(P0.05),3h显著增高(P0.05);胞内钙离子浓度1h明显降低(P0.01)。并且吞噬活性分别与活性氧、钙离子浓度显示良好的相关性。三、感染性休克实验结果显示,补充1,25(OH)2D3组和单纯LPS模型组的半数死亡时间分别为65h和100.5h。急性肺损伤实验中,肺W/D结果显示尾静脉注射LPS2.5mg/kg,6h后补充1,25(OH)2D3组肺W/D明显低于LPS组(P0.05);血清中TNF-a浓度显示注射LPS 5.0mg/kg, 2h后VD+LPS组比LPS组显著升高(P0.01),LPS 2.5mg/kg,2hVD+LPS组明显低于LPS组(P0.01),6h明显高于LPS组(P0.01);肺组织中TNF-a浓度显示注射LPS 5.0mg/kg, 2h后VD+LPS组比LPS组明显升高(P0.05),LPS 2.5mg/kg,2hVD+LPS组明显高于LPS组(P0.01),6h低于LPS组(P0.05);心肌组织中TNF-a浓度显示注射LPS后补充1,25(OH)2D3组均较LPS组有不同程度的升高,5.0mg/kg, 2h和2.5mg/kg,6h明显高于LPS组(P0.05,P0.01)。四、糖尿病患者并发感染主要与GHA1C(%)10、血清25(OH)D≤20 ng/ml、血清1,25(OH)2D3≤20 pg/ml有关。 结论:一、1,25(OH)2D3能够增强巨噬细胞在外源性感染中的防御作用。二、1,25(OH)2D3延长免疫损伤小鼠的生存时间、缓解肺水肿。三、对糖尿病患者而言,血清维生素D水平低是并发肺部感染的危险因素。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R96

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