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《东南大学》 2015年
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1,25-二羟维生素D_3通过VDR-PPARγ通路促使高糖诱导的M1型巨噬细胞向M2型转换

周敏  
【摘要】:目的:糖尿病肾病(DN)的发生发展不仅与肾组织浸润的巨噬细胞数量有关,更与其所呈现的活化状态密切相关。目前认为,经典活化巨噬细胞(M1)具有促炎促纤维化作用,而替代活化巨噬细胞(M2)则发挥抗炎活性。近期研究发现,核受体PPARγ参与巨噬细胞表型活化过程,而活性维生素D(1,25(OH)2D3)具有钙磷代谢调节以外的肾保护作用,但其具体作用机制目前尚未完全阐明。本研究拟通过细胞培养技术探讨1,25(OH)2D3对高糖环境下巨噬细胞活化状态的调节作用及其信号转导机制。方法:采用葡萄糖浓度(11.1mM,20mM,25mM,30mM)和时间(0h,6h,12h,24h,36h,48h)依赖性刺激小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),酶活性法检测细胞内iNOS活力。10-8mol/L 1,25(OH)2D3刺激高糖预孵育的RAW264.7细胞,RT-PCR和Western blot分别检测M1标志物iNOS以及M2型细胞标志物MR和Arg-1的表达;ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-12和IL-10的水平。然后用VDR siRNA和PPARγ拮抗剂分别沉默和阻断相应受体后,再次用上述方法检测M1和M2各标志物的水平,并进一步用免疫荧光观察他们的表达。结果:(1)细胞内iNOS活力呈葡萄糖浓度和时间依赖性表达增加,并且在25mmol/L葡萄糖刺激细胞24h后iNOS活力达到最大。与对照组相比,25mmol/L葡萄糖干预RAW264.7细胞24h后,不仅上清液中炎性细胞因子TNF-α、IL-12表达增多,RT-PCR和Western blot结果显示M1标志物iNOS也表达上调(P0.05),而M2标志物MR和Arg-1的表达则显著下降(P0.05)。(2)干预后,上述趋势被逆转:M1标志物包括TNF-α、IL-12和iNOS的表达明显减少,而M2标志物IL-10、Arg-1和MR则表达增加,并且核受体VDR和PPARγ表达也显著增多(P0.05)。(3)进一步研究发现,VDR siRNA和PPARγ拮抗剂阻断相应受体后,活性维生素D的上述作用均被阻断,而沉默VDR后PPARγ表达也相应减少(与VD组比较1.16±0.08 vs 0.48±0.05;P0.05)。同样免疫荧光显示与VD组相比,抑制VDR和PPARγ表达后,iNOS荧光明显增强,MR和PPARγ荧光表达则明显减弱。结论:1.高糖能诱导巨噬细胞M1型活化;2.1,25-二羟维生素D3能调节巨噬细胞表型,促使高糖诱导的M1型巨噬细胞向M2型转变;3.1,25-二羟维生素D3调节巨噬细胞表型转换的细胞内信号转导机制与VDR-PPARγ通路有关。
【学位授予单位】:东南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R587.2;R692.9

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1 周敏;1,25-二羟维生素D_3通过VDR-PPARγ通路促使高糖诱导的M1型巨噬细胞向M2型转换[D];东南大学;2015年
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