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《东南大学》 2003年
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基于自身抗体谱检测型免疫芯片的制作研究与临床初步应用

虞伟  
【摘要】:生物芯片是通过平面微细加工与生物分子的自组装技术相结合,在固体基片上组装成数目众多的不同生物分子微阵列,以实现对目标DNA、RNA或蛋白质分子信息的大规模检测。这种技术被认为是生命科学研究中的高效工具,因而成为目前国内外科学技术发展的热点。蛋白质免疫检测型芯片有别于一般的DNA芯片检测技术,其原理主要是基于抗原与抗体的特异结合反应来设计的,所测目的分子仅有结构上的专一性,而无序列特异性。本文在分离制备多种生物大分子的基础上,采用分子组装技术,探索出一种新型的适用于不同生物分子偶联的固相载体,即经氧化与化学修饰处理的琼脂糖凝胶基片,成功地在其表面制作了抗原与抗体分子微阵列,建立了3种不同免疫检测模式,包括直接模式、间接模式和双抗体夹心模式,可敏感特异检出抗原、抗体分子及酶与底物之间的相互作用;同时采用辣根过氧化物酶-二氨基联苯胺-双氧水(HRP-DAB-H_2O_2)、胶体金-硝酸银-对苯二酚和荧光素3种不同示踪剂作为蛋白质与抗原分子微阵列的信号显示系统,均取得了较好的效果。经初步对临床疾病标本的研究发现,本法制作的蛋白质与抗原分子微阵列用于自身抗体的检测表现出较好的方法学稳定性和重复性,与ELISA测定结果有较好的一致性,并具有操作简便、结果特异、实验条件易于控制、所需样本和试剂用量小等特点,对于实现高通量的生物分子检测具有重要的意义。 本论文的主要研究工作 1.利用生物化学、免疫学和分子生物学技术,具体的实施方法包括用饱和硫酸胺盐析、差速离心、凝胶色谱分析(分子筛、硅胶柱层析和亲和色谱)、薄层层析技术、聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳对待分离的组分进行分离纯化。制备了10余种不同的生物大分子抗原探针(包括蛋白质、DNA和磷脂分子等),同时就有关自身抗体的检测方法、生物大分子抗原(主要为蛋白质)的一般理化特性、分离纯化原则和基本的实验技术进行了讨论。这些自身抗原分别是甲状腺球蛋白(TG)、甲状腺过氧化物酶(TPO)、肌红蛋白(Mb)、肝特异性细胞膜脂蛋白(LSP)、ENA抗原、精子膜抗原(SmAg)、热聚合兔IgG(AgRIgG)、子宫内膜抗原(EmAg)、人卵巢抗原(O-Ag),心磷脂,dsDNA和ssDNA
【学位授予单位】:东南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R392

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【参考文献】
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