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《南京理工大学》 2008年
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氧化脂蛋白(a)检测及临床应用研究

孔令涛  
【摘要】: 高脂蛋白(a)[Lp(a)]作为动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)性心、脑血管疾病的独立危险因素己得到公认,氧化Lp(a)[ox-Lp(a)]可导致巨噬细胞转变为泡沫细胞,干扰纤溶系统正常功能的发挥,促进细胞因子的释放,加速As进程。 目的:(1)人血清中ox-Lp(a)自身抗体提取和特性分析。(2)分别采用ox-Lp(a)自身抗体、氧化LDL(ox-LDL)多克隆抗体,酶标抗载脂蛋白(a)[apo(a)]为检测抗体的酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定ox-Lp(a)水平。(3)探讨ox-Lp(a)水平在动脉粥样硬化(As)性心脑血管疾病中的变化及其机制,准确评价其临床价值。(4)对Lp(a)进行不同程度氧化、修饰,检测Lp(a)氧化位点等特性的改变。 方法:(1)采用溴化氰活化的sepharose 4B交联ox-Lp(a)制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗ox-Lp(a)自身抗体。(2)分别建立以抗ox-Lp(a)的自身抗体、抗ox-LDL多克隆抗体为包被抗体,酶标抗载脂蛋白(a)[apo(a)]为检测抗体的ox-Lp(a)ELISA检测法。(3)采用ELISA法测定139例冠心病组患者ox-Lp(a)水平,分析其与冠心病之间的关系。(4)采用不同浓度的Cu~(2+)和丙二醛(MDA)分别对Lp(a)进行氧化、修饰,观察不同时相硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)、共轭双烯(CD)和氧化位点等特性的改变。 结果:(1)所分析的8份正常人血清中均存在抗ox-Lp(a)自身抗体,与ox-Lp(a)、ox-LDL均具有良好的反应性;再经亲和层析除出抗ox-LDL自身抗体后,2份标本同ox-Lp(a)仍具有较高的反应性。(2)建立的两种ELISA检测法均同ox-Lp(a)具极强的免疫反应性,而同天然、MDA修饰的Lp(a)具极低的免疫反应能力。同对照组相比,两种ELISA法间结果高度相关(r=0.78,P0.0001)。(3)本组冠心病患者血浆Lp(a)水平显著升高[(279.6±162.7)mg/L对(206.3±126.4)mg/L,P0.0001];ox-Lp(a)水平亦明显增加(PO.0001),采用自身抗体和抗ox-LDL抗体建立的ELISA法测定结果分别为:(24.3±33.4)μg/ml对(8.4±9.3)μg/ml和(13.0±13.8)μg/ml对(7.3±9.7)μg/ml。ox-Lp(a)水平与冠心病病变程度密切相关,双支血管病变组患者TC水平高于单支血管病变组(p0.01);多支血管病变组患者ox-Lp(a)水平明显高于双支血管病变组和单支血管病变组(p0.01)。(4)氧化、修饰引起Lp(a)TBARS值、CD值及ox-Lp(a)水平发生改变,三者水平先逐渐增加达到峰值,随后进入降解阶段;天然Lp(a)水平与氧化时间相关(r=-0.437,p=0.002);TC、TG的水平随Cu~(2+)和MDA的浓度的增大而发生变化。 结论:提取的人血清ox-Lp(a)自身抗体可识别apo(a)和apoB氧化位点,采用自身抗体建立的ox-Lp(a)检测法能更真实、准确地反应体内Lp(a)的氧化状态。基于此法所检测的ox-Lp(a)水平明显高于正常人,表明ox-Lp(a)与冠状动脉病变的发生发展之间可能存在一定的相关性。氧化、修饰的Lp(a)结构和生物特性发生改变,TBARS和CD随时间的变化而变化,氧化后也产生了新的氧化位点。
【学位授予单位】:南京理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R446.6

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【参考文献】
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