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乌饭树叶黄酮的提取、分离及结构鉴定

张德谨  
【摘要】:乌饭树为杜鹃花科,在我国长江以南各省分布较为广泛,是一种传统的中药材。黄酮作为乌饭树叶的主要功能性成分,具有抗氧化、抑菌、抗癌防癌、降低血糖和血脂水平等多种生理活性,因此乌饭树叶黄酮可以开发成临床药物、天然防腐剂以及保健品,市场前景广阔。基于目前乌饭树叶黄酮的研究现状,本论文在建立乌饭树叶黄酮定量方法的基础之上,首先对超声-微波辅助提取乌饭树叶黄酮的工艺进行优化,建立提取过程的数学模型,探讨了大孔树脂纯化乌饭树叶黄酮工艺以及大孔树脂吸附黄酮过程中的动力学及热力学问题,采用有机溶剂萃取、大孔树脂、聚酰胺以及硅胶柱等纯化方法,得到乌饭树叶黄酮单体VBTL4A,然后利用质谱、核磁共振技术、红外光谱等方法对其结构进行鉴定,主要的研究结论如下:1.荧光分光光度法测定乌饭树叶中总黄酮含量的测定条件为:激发波长为434 nm,发射波长为484 nm,5%Al Cl3的体积为1 m L,p H为4.4,静止时间为5 min,采用无水乙醇定容。在确定的测定条件下方法具有较好的重复性、较高的回收率和稳定性,表明该方法简便、可靠,适合用于测定乌饭树叶总黄酮含量。2.通过响应面法优化确定超声-微波辅助提取乌饭树叶黄酮的最佳工艺为:微波功率140 W,温度69℃,液固比51(m L/g),时间11 min,在此条件下,乌饭树叶黄酮得率为3.64%。红外分析表明超声-微波辅助提取技术没有破坏黄酮类化合物的结构。在菲克第二定律的基础上,建立了超声-微波辅助提取乌饭树叶黄酮过程的数学模型。通过考察在不同提取温度、微波功率以及液固比条件下模型的适用性,证明该模型能够较好的适用于超声-微波辅助提取乌饭树叶黄酮过程。3.通过静态与动态实验,确定NKA-2树脂纯化乌饭树叶黄酮工艺为:上样浓度0.75 mg/m L,上样体积为2 BV,上样流速为1 m L/min,洗脱剂为50%的乙醇,洗脱流速为1 m L/min,洗脱体积为3 BV。在此条件下,蛋白质和多糖的脱除率分别为76.32%和65.45%,黄酮纯度达到48.92%。通过对NKA-2树脂吸附黄酮过程的吸附动力学、等温线以及热力学进行研究,确定准一级动力学模型和Freundlich等温线方程更适合描述NKA-2树脂吸附乌饭树叶黄酮的过程。4.通过大孔树脂、聚酰胺以及硅胶柱色谱等手段对乌饭树叶黄酮进行纯化,得到黄酮单体VBTL4A。利用红外、质谱、核磁等分析方法对VBTL4A的结构进行鉴定,最终确定VBTL4A为2,4,6,2',4',6'-六羟基查尔酮。


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