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《南京工业大学》 2002年
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荧光酮类试剂—钼(VI)光谱探针测定蛋白质的研究

王晓东  
【摘要】: 本文详细介绍了蛋白质定量分析的一些主要方法及其在生物化学、药物、食品、临床医学方面的应用概况,这些方法包括最早的浊度法、凯氏定氮法,和目前研究最多、应用最广、操作较为简便的分光光度法、荧光光度法,还有新进展起来的共振瑞利散射法、高效液相色谱法、毛细管电泳分析法。实验中选取以苯基荧光酮、水杨基荧光酮为母体、具有不同取代基的苯基荧光酮(PF)、邻硝基苯基荧光酮(o-NPF)、间硝基苯基荧光酮(m-NPF)、邻氯苯基荧光酮(o-CPF)、间氯苯基荧光酮(m-CPF)、对氯苯基荧光酮(p-CPF)、2′、4′-二氯苯基荧光酮(2′、4′-DCPF)、二溴羟基苯基荧光酮(DBH-PF)、水杨基荧光酮(SAF)、5′-硝基水杨基荧光酮(5′-NSF)、3′、5′二溴水杨基荧光酮(3′、5′-DBSF)等十一种三羟基荧光酮类试剂。三羟基荧光酮类试剂-钼(VI)配合物作为定量测定蛋白质的光谱探针,用分光光度法系统地研究了其与蛋白质分子的反应条件,如酸度、介质及用量、显色剂用量、反应时间、离子强度、干扰离子、最大结合数、摩尔吸光系数ε等,建立了一系列定量测定蛋白质的新方法;并首次将微乳液作为介质用于蛋白质测定中,起到了增溶增敏的作用,提高了体系的灵敏度。 试验结果表明,三羟基荧光酮类试剂-钼(VI)配合物作为定量测定蛋白质的光谱探针具有很高的灵敏度。现有文献记载金属离子—染料结合光度法中灵敏度最高的体系是水杨基荧光酮-钼(VI)-BSA体系,其摩尔吸光系数为2.86×10~6Lmol~(-1)cm~(-1)。本论文中新建立的十一种体系中5′-NSF-Mo(VI)-BSA体系、o-NPF-Mo(VI)-BSA体系、DBH-PF-Mo(VI)-BSA体系摩尔吸光系数分别达到:8.71×10~6Lmol(-1)cm(-1)、9.06×10~6Lmol~(-1)cm~(-1)、15.30×10~6Lmol~(-1)cm~(-1),其摩尔吸光系数分别是水杨基荧光酮-钼(VI)-BSA体系的3.0、3.2、5.4倍。 试验还表明,微乳液比胶束对体系有更好的增溶增敏作用。微乳液体系比胶束体系有较高的摩尔吸光系数,从而验证了微乳液比胶束对体系有更好的增敏作用。 在实验基础上,选取与BSA反应灵敏度较高的5′-NSF-Mo(VI)、o-NPF-Mo(VI)、DBH-PF-Mo(VI)作为光谱探针,应用于人尿样、人血样、奶粉中蛋白质的分析测定上,取得了令人满意的结果。 本论文的系统性、科学性和新颖性: 1.系统性: 本论文系统地研究了具有不同取代基的三羟基荧光酮类试剂-钼(VI)配合物光谱探针与蛋白质分子的反应条件(酸度、介质及用量、显色剂用量、反应时间、离子强度、干扰离子、最大结合数、摩尔吸光系数ε)及取代基、取代基位置对体系灵敏度的影响,为建立高灵敏度定量测定蛋白质的方法奠定了基础。 2.科学性: 摘要 荧光酮类试剂一金属离子配合物光谱探针光度法测定蛋白质灵敏度高且抗干扰能力 强,成为微量蛋白质检测的一种灵敏方法。本论文通过大量的科学实验建立了更灵敏的方 法,灵敏度比文献记载的方法高5.4倍,应用于人尿样、人血样、奶粉中蛋白质的分析 测定上,取得了令人满意的结果。 3.新颖性: 首次将微乳液作为介质用于蛋白质测定中,起到了增溶增敏的作用,提高了体系 的灵敏度;论文中所用的大部分荧光酮类试剂都是首次用于蛋白质的测定,建立了一 系列定量测定蛋白质的新方法。
【学位授予单位】:南京工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:O657.3

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