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肉毒梭菌的筛选及菌株的鉴定

江扬  
【摘要】: 肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum,简称肉毒梭菌)在厌氧环境 下可产生一系列毒性极强烈的外毒素——肉毒毒素(botulinum toxin,BTX)。 目前,肉毒毒素已广泛应用于眼科、神经科、康复科、消化科及皮肤科(多汗症、 美容)等领域的病症治疗,并在美容抗皱方面有极好的效果。此外,肉毒毒素也 可作为一种新的生物灭鼠农药。因而,肉毒毒素具有重要的应用价值。 本论文对肉毒毒素的产生菌——肉毒梭菌的筛选方法、分离纯化及检测手段 进行了初步的研究,得出了以下结果: 1.从豆制品、肉制品、水产品等食品加工场所采集了50份样品,结果表明 芽孢杆菌以在豆制品加工场所的土壤样品中为多。 2.针对芽孢杆菌的筛选,样品预处理采用了两种方法——加热处理法和乙醇 处理法。试验结果表明,乙醇处理法的效果优于加热处理。 3.经富集培养、分离培养及多次分离纯化后,最终从豆腐坊附近土壤样品中 获得一株具有肉毒梭菌典型特征的菌株。 4.对筛选得到的菌株进行了初步的鉴定,该菌株革兰氏染色呈阳性,为粗大 杆菌,两侧平行,两端钝园,直杆状或稍弯曲,芽孢为卵圆形,位于次极端,呈 网球拍形;乳糖卵黄牛奶平板上,其菌落下培养基为乳浊,菌落表面及周围形成 彩虹薄层,与肉毒梭菌的典型形态特征相符。生理生化试验结果表明该菌株属于 分解蛋白质的肉毒梭菌B、F组中的一型。毒性试验结果说明筛选得到的菌株属 于B型肉毒梭菌。免疫学鉴定表明菌株所产毒素与B型抗血清出现沉淀反应,确 定该菌株属于B型肉毒梭菌。依据毒性试验及免疫学鉴定结果基本确认该菌株即 B型肉毒梭菌。 5.毒性试验中,大体判定该菌株发酵液中毒素的毒力为1000~10000MLD/ml, 毒力较高。


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