收藏本站
《南京工业大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

固态发酵产酶及DL-色氨酸的拆分

孟涛  
【摘要】: 色氨酸主要用于医药行业,如氨基酸输液、抗闷剂和抗臭滤药等,与铁复合剂、维生素合用可提高抗贫血疗效,还可用作消化溃疡组氨酸的佐药。同时,色氨酸是继蛋氨酸,赖氨酸之后第三大饲料添加剂,由于其对动物生长的独特作用,将有可能成为饲料添加剂行业的后起之秀。但目前过高的售价(60万/吨以上)限制了其大规模应用,若能降低其制备成本,其年需求量将会有大幅度的增长。近年来,开发色氨酸的规模化、低成本制备方法,一直是氨基酸制造行业的热点。 本论文对米曲氨基酰化酶的拆分制备L-色氨酸进行了优化研究:包括固态发酵产米曲酶的优化研究,米曲氨基酰化酶的分离纯化及其酶学性质研究,以及氨基酰化酶的固定化研究。 对于固态发酵制备氨基酰化酶,对制曲条件和固态发酵培养基的组成进行了研究:最佳发酵培养基组成基质原料比为8:2,水活度为0.7,最佳产酶时间为48h。添加诱导物基本上没有作用。复合促进剂中吐温-80和植酸同时存在时米曲霉3042的激活作用大幅度提高。添加复合促进剂后,固态发酵米曲霉产氨基酰化酶的酶活达到最高值的时间为35-40h,可以比不加促进剂的时间缩短了5-10h;且拆分N-乙酰-DL-色氨酸的酶活也提高171.94%。 对米曲氨基酰化酶的纯化研究,尝试了硫酸铵盐析分级沉淀、疏水层析、凝胶电泳等一系列粗分级和细分级的纯化方法,并对米曲氨基酰化酶的酶学性质进行了探讨。用硫酸铵分级沉淀,40%饱和度去除大部分杂蛋白,60%饱和度时沉淀下来的大部分是所需要的酶,盐析纯化倍数可达6倍。粗酶液经疏水层析柱后,纯化倍数可达28倍。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定氨基酰化酶亚基分子量,凝胶电泳有2条带,第一条带的分子量为66,200Da第二条带的分子量为31,000Da。 WP=4 氨基酰化酶的最适pH值为7.2,最适底物浓度0.25mol·L-1 ,最适反应温度为55℃,在高底物浓度时存在底物抑制,Co2+能提高酶活力,Fe2+对酶有轻微抑制作用,产物L-色氨酸和醋酸根对酶有较强的抑制。盐浓度对拆分过程是有抑制作用。抑制剂对保存稳定性的研究可见,DTT加入量为3mmol/L时,使酶保存稳定性有所提高。对粗酶制剂进行了尝试,自制冻干粉保存稳定性良好,可保存半年不失活。 研究了氨基酰化酶的多种包埋方法,尝试了合成树脂共价交联法固定化米曲氨基酰化酶。用不覆膜,单次覆膜和两次覆膜的固定化酶进行批次拆分实验比较,两次覆膜改性海藻酸钙凝胶包埋固定化氨基酰化酶效果最好,能反应20个批次。合成树脂柔性链共价交联固定化酶的实验,柔性链越长固定化效果越好。戊二醛用量0.8%对于0.2g粗酶冻干粉和0.2g树脂固定化来说效果最好。
【学位授予单位】:南京工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:TQ920

知网文化
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 曾宪纲;谢强;郭泰;周海梦;;盐酸胍变性氨基酰化酶再折叠的研究[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
2 杨冬;祖元刚;安利佳;;孔石莼氨基酰化酶的纯化和性质分析[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
3 陈勇川;唐敏;向荣凤;熊丽蓉;谢林利;夏培元;;米屈肼的药代动力学研究[A];2008年成渝药学学术年会论文集[C];2008年
4 陈勇川;唐敏;向荣凤;熊丽蓉;谢林利;夏培元;;米屈肼的药代动力学研究[A];中国药理学会药学监护专业委员会第一届第四次学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
5 陈体强;吴锦忠;徐洁;;植物产品中γ-氨基丁酸的测定[A];第八届全国中药和天然药物学术研讨会与第五届全国药用植物和植物药学学术研讨会论文集[C];2005年
6 赵华杰;杨荣华;戴志远;;贻贝蒸煮液发酵调味品的感官评价及呈味成分的分析[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
7 杨荣华;何炘;戴志远;;顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用分析发酵前后贻贝蒸煮液中的香气成分[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
8 曹飞;石开风;周华;韦萍;;K003交联法固定化米曲霉菌体光学拆分DL-色氨酸的研究[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
9 C.楚伦;;博克多汗制蒙古国政府高官之死(基立尔文)[A];蒙古史研究(第十辑)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 邵友光;庐山昔日餐桌上的野菜[N];九江日报;2007年
2 熊庆荣;半夏[N];民族医药报;2004年
3 记者 张兆军 通讯员 于万冰;“刻写”世界高精尖[N];科技日报;2001年
4 孔章;甜味麦面酱[N];河南科技报;2006年
5 记者  王俊鸣;科学家测绘出三种霉菌基因组图谱[N];科技日报;2005年
6 林萃芬;教你5步快速看透人心[N];北京科技报;2006年
7 沉香;五香黄豆酱油[N];湖北科技报;2001年
8 尹先;五香黄豆酱油[N];湖北科技报;2002年
9 刘淑新;五香黄豆酱油的制作新工艺[N];山西科技报;2001年
10 徐蜀远;曲坦类药物的安全性[N];中国医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 董涛;氨基酰化酶交联聚集体的制备及其催化性能研究[D];天津大学;2010年
2 杨冬;孔石莼氨基酰化酶和碱性磷酸酶的分离纯化和性质分析[D];东北林业大学;2001年
3 王燕;米曲霉氨基酰化酶的固定化及其拆分N-乙酰-DL-苯甘氨酸的研究[D];天津大学;2003年
4 曹飞;饲料级L-色氨酸的制备[D];南京工业大学;2002年
5 郑洪远;美洲花蜱对杀虫剂的毒理学和生理学反应及长角血蜱雄性特异性抗菌肽的基因克隆和特性分析[D];河北师范大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孟涛;固态发酵产酶及DL-色氨酸的拆分[D];南京工业大学;2003年
2 王霞;氨基酰化酶产生菌米曲霉发酵条件的优化[D];内蒙古工业大学;2010年
3 石开风;米曲氨基酰化酶的液态发酵及其固定化[D];南京工业大学;2004年
4 俞一军;DL-苯丙氨酸的合成和拆分[D];浙江大学;2002年
5 崔香梅;氨基酰化酶产生菌米曲霉3042发酵条件、酶的纯化及酶学性质的研究[D];延边大学;2001年
6 钟琦;氨基酰化酶法拆分制备手性氨基酸[D];浙江大学;2004年
7 王伟;羊肾中氨基酰化酶的提取及应用[D];新疆农业大学;2007年
8 杨瑞东;固定化酶反应器的耦联及高纯度D-蛋氨酸的制备[D];天津大学;2007年
9 高翔;树枝状大分子用于氨基酰化酶的固定化研究[D];北京化工大学;2009年
10 阎晓敏;树脂DEAE-E/H固定化氨基酰化酶的研究与乙酰-DL-蛋氨酸酶拆分液分离[D];天津大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026