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《南京工业大学》 2003年
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胺基柔性载体固定木瓜蛋白酶的研究

蒋雯  
【摘要】:本文在传统的酶固定化模型基础上提出了酶的柔性固定化模型:在固定化载体上,接上一些有足够长度的且是亲水的分子链(“柔性链”), 以制备“柔性载体,而后再将酶与该柔性载体进行共价结合。该模型的特点就在于可以避免固定化过程中酶与载体的刚性碰撞,以维持酶的构象,提高固定化酶的活性和稳定性。实验中,我们主要研究了柔性固定化模型中胺类柔性载体的制备,以及用所制备的胺类柔性载体对木瓜蛋白酶进行的柔性固定化。 首先,本文概括了国内外酶固定化技术发展状况,总结了传统的酶固定化方法、原则及相关载体性能。并在此基础上,提出了柔性固定化模型及本课题的研究目的和意义。 其次,本文以傅克反应制备的氯乙酰聚苯乙烯微球作为原料树脂,研究了该原料树脂与不同分子量的胺制备胺类柔性载体(胺基树脂)的反应。具体讨论了不同实验条件,如分散时间、分散溶剂、反应时间、反应温度、原料树脂的取代度和粒径以及催化剂等对胺基树脂增重率的影响,并通过红外光谱以及元素分析对其进行了表征。实验结果表明:用DMF作溶剂分散原料树脂的效果优于其他溶剂;分散时间至少需要8.5h;胺化反应的最佳温度为80℃;四乙烯五胺的用量超过4ml,增重率可达最大;由粒径小、取代度低的原料树脂制备的胺基树脂,其增重率更为接近理论增重率。通过以上条件的优化,可以获得增重率为21.8%,N%=8.7%,担载量为6.2mmol/g-NH2的胺基树脂。此外,由残留氯含量的测定,我们还发现,原料树脂的氯不仅与伯胺还与仲胺反应。 第三,本文初步研究了胺类柔性载体对木瓜蛋白酶的固定化。实验显示,在采用方法—用戊二醛直接进行固定化时,戊二醛的最适浓度为0.4%(体积百分比);在采用方法二即用醛基柔性载体对木瓜蛋白酶进行固定时,它的效果要优于方法一。 最后,本文在总结前文的基础上,对今后的柔性固定化模型研究工作提出了一些建议和构想。
【学位授予单位】:南京工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q814

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【引证文献】
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