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国产单分散聚苯乙烯微球用于生物分离的研究

邵勇军  
【摘要】:单分散聚苯乙烯微球(Microsphere,麦科菲)不仅具有稳定性和机械性能优良、易功能化、耐清洗和长使用寿命等优点,而且具有高分离效率,适宜作为HPLC填料的载体材料。 国产单分散聚苯乙烯微球所装填成的国产麦科菲色谱柱(150×4.6mm),用于IL-2分离的最佳梯度条件为:流动相A液:0.1%TFA、流动相B液:80%乙腈+0.1%TFA、B液在30min内从0%线性增大至100%、流速为1mL/min;在该最佳条件下进行系统性实验,结果表明:麦科菲色谱柱的理论板数、分离度、重复性(RSD)和拖尾因子均能达到药典规定,且理论板数和分离度与SOURCE色谱柱相当;国产麦科菲色谱柱的pH范围为1~14;柱压力降与SOURCE色谱柱相当,而低于Hypersil C_8色谱柱和Polaris C_(18)色谱柱的柱压,可在更高流速下操作;麦科菲色谱柱的非极性与SOURCE色谱柱相当,而小于Hypersil C_8色谱柱和Polaris C_(18)色谱柱的非极性,更有利于生物分子的活性回收;国产麦科菲分析柱(150×4.6mm)对IL-2进样液的最大载样量为300μg;根据线性放大公式,国产麦科菲制备柱(250×10.0mm)的流速为7.9mL/min;对IL-2的载量为2.36mg;制备柱分离IL-2的纯度和活性经检测,均符合质控要求。 为了推广国产麦科非色谱柱在反相色谱分离中的使用,本文选择七叶皂甙和蛋白(BSA、OVA)作样品,分别在等度洗脱和梯度洗脱条件下进行反相色谱分离。等度洗脱实验结果表明:表面键合C18链的麦科菲有机反相色谱柱(MKF-C_(18))对七叶皂甙的分离效果,要好于未键合的麦科菲反相色谱柱(MKF-PS)的分离效果;而在同获分离的情况下,MKF-C_(18)柱的背压只有ODSC_(18)色谱柱的背压的1/3左右;由于MKF有机反相色谱柱可在宽pH条件下使用,且对水稳定,因此有广阔的应用前景;麦科菲色谱柱(MKF-C_(18))在乙腈体积分数为32%时可使四种主要成分:七叶皂甙A、七叶皂甙B、七叶皂甙C、七叶皂甙D之间实现完全分离,四种主要成分的容量因子的对数与乙腈的体积分数呈线性关系,其相关系数均大于0.997。国产麦科菲色谱柱对BSA和OVA的柱效和分离度随线性梯度斜率增大而降低,最佳分离条件为:流动相A液(0.1%TFA)、梯度条件为流动相B(0.1%TFA+80%CH_3CN)在30min内从0%线性增大至100%、


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