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《江南大学》 2011年
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低蛋白酶A酵母菌株的选育

李刚  
【摘要】:啤酒泡沫是衡量一瓶啤酒质量好坏的一个重要指标。纯生啤酒是近些年来在国际、国内市场兴起的一种新兴啤酒品种,随着纯生啤酒的兴起,纯生啤酒泡沫稳定性问题越来越多的被人们所关注。啤酒酵母所分泌的蛋白酶A被公认为是影响纯生啤酒泡沫稳定性最重要因素。本论文采用紫外诱变、N~+离子束注入诱变手段选育低产蛋白酶A的酵母菌株,拟从根本上解决纯生啤酒因蛋白酶A存而引起的泡沫稳定问题。 本研究比较了酸变性牛血红蛋白平板、羧肽酶Y平板、96孔板筛选、Bradford法筛选和荧光底物法筛选五种筛选方法,最终确立以96孔板筛选方法作为初筛方法,Bradford法筛选作为复筛方法,荧光底物法作为最终测定蛋白酶A活力的方法选育低蛋白酶A酵母菌株。 紫外诱变是常用的一种诱变手段。本研究采用该诱变手段对本研究室保藏的酵母菌株MⅠ4进行诱变处理。最终获得四株突变株,突变株的蛋白酶A荧光强度较出发菌株均有不同幅度降低,其中三株突变株降低幅度较大。 N~+离子束注入诱变是近些年兴起的一种新的诱变方法,整个作用过程经历物理、化学和生物四个阶段,是一种复合诱变,具有突变效率高、损伤小等一系列优点。本研究是可见报道中第一次采用该方法对啤酒酿造用酵母进行诱变。采用该手段对本研究室保藏的酵母菌株M~I_4进行诱变处理,最终获得两株突变株,其蛋白酶A荧光强度较出发菌株均有不同幅度降低,但降低幅度没有紫外诱变效果明显。 对突变株进行发酵实验发现,突变株发酵性能较出发菌株均有不同幅度降低。EBC发酵管实验结果表明,突变株的发酵能力较三角瓶发酵均有不同幅度的提升,但仍低于出发菌株,其中突变株M~I_4-A和M~I_4-D的各项指标与出发菌株相比较接近,具有一定的工业应用前景。 分析比较出发菌株和突变菌株编码蛋白酶A的基因pep4发现,紫外诱变筛选获得的四株突变株共发生7个氨基酸替代,1个同义突变。M~I_4-A突变为L8S、K387I,M~I_4-B突变为S16G、K39R、D393E、N397K、A402T,M~I_4-D于399为发生一个同义突变。突变体M~I_4-C的pep4未发生任何突变;离子束注入诱变筛选获得的两株突变株中M~I_4-F发生一个同义突变,M~I_4-E未发生任何突变。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:TQ925

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【参考文献】
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