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免疫磁珠的制备及对植物油中黄曲霉毒素B_1的检测

刘伟伟  
【摘要】:植物油脂是人类生活的必需品。我国作为植物油脂消费大国,植物油安全对保障人民健康、促进贸易增长以及维护社会和谐发展具有重要意义。植物油脂原料中的各种真菌毒素污染,已成为食用植物油的重要安全隐患,因此开展植物油中黄曲霉毒素检测研究具有重要意义。 免疫磁珠净化作为一种前处理手段用于植物油中黄曲霉毒素B1(AFB_1)的检测可以避免很多传统检测方法的缺点,同时和HPLC结合可以改善信噪比,提高检测方法的准确度并且减少了操作的时间,达到既定量准确又快速简便的要求,大大提高工作效率。本研究建立了化学和生物免疫磁珠检测植物油中黄曲霉毒素B1的方法并取得了显著的应用效果。 本研究得到的主要结果和结论如下: 1、利用化学共沉淀的方法,制备得到了主要成分为Fe_3O_4的超顺磁性纳米磁珠。磁珠外层的羟基和硅烷偶联剂氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)反应带上氨基基团。带上氨基的磁珠通过戊二醛活化之后发生醛基化,和AFB_1多克隆抗体偶联从而得到Fe_3O_4免疫磁珠。 2、从无锡太湖水域中分离到了一种沿着磁力线运动的微好氧细菌-趋磁细菌,经过富集和细菌的生长培养,该趋磁细菌体内产生了粒径在15nm左右的磁性纳米颗粒—磁小体。将该纳米磁性粒子和抗体通过偶联剂偶联,得到了具有功能性的免疫磁小体。 3、以制备得到的免疫磁珠为净化工具,建立了有机溶剂萃取、免疫磁珠净化、高效液相色谱法(HPLC)检测植物油样品中AFB_1的方法。该方法具有良好线性,相关系数达到0.9993,线性范围为2~50ng/mL。其中利用化学合成的免疫磁珠进行前处理,AFB_1加标回收率达到73.1%~82.9%,磁小体免疫磁珠为净化工具得到的加标回收率为87.5%~93.1%,并且整个前处理过程可以控制在30min内完成,具有快速、简便、准确性高等优点。


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