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《江南大学》 2014年
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硝基呋喃类抗菌素代谢物免疫学快速检测方法的建立

尹玉云  
【摘要】:具有潜在“三致”作用的硝基呋喃类抗菌素在国内外虽已禁用二十余年,但时至今日硝基呋喃类抗菌素及其代谢物残留仍时有检出。本文旨在基于免疫学原理,研究出硝基呋喃类代谢物的一种快速检测方法,为此,本研究的重点是先制备出灵敏度高、特异性强的单克隆抗体,然后建立间接竞争ELISA (icELISA)检测方法并对其进行优化,最后对优化条件下的icELISA进行鉴定。 首先,将硝基呋喃类代谢物与乙醛酸、对醛基苯甲酸及对硝基苯甲醛进行衍生合成半抗原及标准品并用液相色谱串联四级杆飞行时间质谱仪进行鉴定;采用活泼酯法及混合酸酐法将半抗原与载体蛋白偶联合成完全抗原,并用紫外进行表征。 用免疫原免疫小鼠,通过不断地免疫、血清检测筛选出效价高、抑制效果好的小鼠,取其脾脏进行细胞融合并筛选出效果最好的细胞株,制备腹水、纯化,得到单克隆抗体。 建立icELISA并对包被原、标准品溶解用溶剂、标准品稀释液的pH及NaCl浓度进行了一系列的优化,将优化好的icELISA进行灵敏度、特异性、准确性的鉴定。优化结果显示,样品稀释液的pH及NaCl浓度对抗体的IC50均有较大影响。通过icELISA条件的优化,成功地将SEM、AHD、AOZ、AMOZ抗体的IC50由0.061ng ml-1、0.17ngml-1、0.12ng ml-1、0.54ng ml-1优化到了0.011ng ml-1、0.07ng ml-1、0.10ng ml-1、0.54ngml-1,优化后的最低检测限LOD分别为0.0013ng ml-1、0.022ng ml-1、0.011ng ml-1、0.067ng ml-1。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:O657;R967

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