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《江南大学》 2014年
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绍兴黄酒多糖的分离提取、生物活性及其对肠道微生物的影响

沈赤  
【摘要】:人们对于黄酒的需求已从“嗜好消费”转变到“营养消费”,并且黄酒低度、营养、健康、养生等特点,极大促进了黄酒行业的快速发展。目前对黄酒中生物活性物质的研究主要集中在氨基酸、多酚和多肽,尚未能对黄酒生物活性多糖进行深入研究。 本文研究了绍兴黄酒多糖的提取、分离纯化工艺进行研究,并初步解析了绍兴黄酒多糖的结构,同时评价了绍兴黄酒多糖的免疫调节、抑制肿瘤和肠道微生物调节等作用。主要研究结果如下: (1)在单因素实验的基础上,通过Box-Behnken实验设计、模型建立和响应面分析,确立了绍兴黄酒多糖的最佳醇沉工艺参数:黄酒原液浓缩比为3.0、乙醇浓度为82%、醇沉时间为19.0h、醇沉温度为3.4℃,在此修正工艺条件下,黄酒多糖的提取量为30.49g/L,与理论预测值相比,相对误差小于1%。 (2)绍兴黄酒多糖的体外抗氧化实验表明,在所考察的范围内,随着绍兴黄酒多糖浓度的增加,绍兴黄酒多糖的自由基清除能力逐渐增强。与BHT相比,绍兴黄酒多糖的自由基清除能力稍低,但是当黄酒多糖浓度达到1.0mg/mL时,对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子的清除率分别达到92%、53%和86%,分别是同浓度BHT自由基清除率的95.83%、56.99%和90.53%。 (3)采用DEAE-Sepharose FF色谱柱和葡聚糖凝胶G75色谱柱对黄酒粗多糖进行分离纯化,得到一种白色的黄酒多糖组分CRWP1;并且其HPGPC洗脱峰呈单一、对称正态分布,说明绍兴黄酒多糖组分CRWP1为分子量为7850Da的高纯度多糖组分。通过单糖组成分析、UV、FT-IR以及NMR证明,阿拉伯糖、葡萄糖和木糖是构成CRWP1的主要组分,并含有少量岩藻糖、半乳糖和甘露糖;含有α糖苷键构型,单糖残基的构型为吡喃型,以1,3糖苷键为主链,存在1,4糖苷键支链。 (4)绍兴黄酒多糖组分CRWP1能够提高免疫缺陷小鼠免疫器官指数,明显改善环磷酰胺诱导的小鼠巨噬细胞的吞噬能力,促进脾淋巴细胞的增殖;同时,绍兴黄酒多糖组分CRWP1能提高免疫缺陷小鼠血清中细胞因子(IL-6、IFN-γ、TNF-α)的含量以及免疫球蛋白和补体含量,表明绍兴黄酒多糖组分CRWP1能够改善免疫缺陷小鼠的免疫功能。 (5)绍兴黄酒多糖组分CRWP1可以明显改善S180荷瘤小鼠免疫器官(脾脏和胸腺)的免疫功能;同时,不同绍兴黄酒多糖组分CRWP1处理组的抑瘤率分别为62.04%(15mg/kg.d环磷酰胺+50mg/kg.d黄酒多糖组分CRWP1)、78.78%(25mg/kg.d环磷酰胺+50mg/kg.d黄酒多糖组分CRWP1)、84.49%(35mg/kg.d环磷酰胺+50mg/kg.d黄酒多糖组分CRWP1),揭示绍兴黄酒多糖组分CRWP1对环磷酰胺协同增效作用。 (6)绍兴黄酒多糖组分CRWP1抗肿瘤作用机理表明,绍兴黄酒多糖组分CRWP1通过阻碍S180瘤组织中Ki-67的表达来抑制细胞的增殖;通过阻碍S180瘤细胞中CyclinD1的表达,调节肿瘤细胞周期以诱导肿瘤细胞的凋亡;此外,绍兴黄酒多糖组分CRWP1还能够激活Bax基因,促进Bax蛋白的表达并抑制Bcl-2表达,提高Bax/Bcl-2比例,使细胞凋亡程序得以启动,从而抑制肿瘤细胞的生长。 (7)绍兴黄酒多糖组分CRWP1能够抵抗胃酸和α-淀粉酶的水解,最大水解度不超过5%,说明其在胃酸中具有较好的稳定性,耐受消化道的消化;绍兴黄酒多糖组分CRWP1能促进小鼠肠道内双歧杆菌、乳杆菌等有益菌的增殖并且抑制肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌的增殖;黄酒多糖组分CRWP1可调节小鼠肠道内的短链脂肪酸、乙酸、丁酸、乳酸含量的增加,发挥益生元作用。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:TS262.4

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