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利用多种分子生物学方法建立一种酿酒酵母高产乙醇的技术

ASHRAF ABDELKAREM MOHAMED MAHMOUD ELROTAIL  
【摘要】:近年来,全转录工程方法(Global Transcription Machinery Engineering,gTME)由于其在改变基因转录以获得有益细胞表型方面的高效应用而得到了广泛关注。本研究中,我们运用基因操作策略(具体为分子生物学技术),通过全转录工程技术的筛选,得到了一株SPT15和TAF23双基因突变的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)二倍体菌株。通过引物对SPT15-EcoRI-FW/SPT15-SalI-RV和TAF23-Sal I-FW/TAF23-NheI–RV进行PCR扩增分别得到的SPT15和TAF23基因,相应酶切后各自连接质粒pYX212,分别转化单倍体酿酒酵母MAT-a[CICC 1374]和MAT-α[CICC 31144],单倍体融合后得到同时含有质粒pYX-SPT15和pYX-TAF23的二倍体菌株,并对其进行了一系列稳定性实验的验证。本研究中,我们对易错PCR中提高MnCl2浓度以代替MgCl2的方法进行了修正,并发现这会对应用gTME方法产生重要影响。基于此而得到了90株以上生物乙醇产量有显著提高的突变株,其中3%MnCl2的突变株产量最高,比对照菌株提高了60.24%。


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