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《江南大学》 2018年
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凤丹白牡丹花瓣总黄酮的分离纯化及结构鉴定研究

吴颖  
【摘要】:凤丹白(Paeonia ostti cv.‘Phoenix White’)为药科芍药属,是牡丹的一种。目前利用较多的是其种籽与根皮,花瓣部位的功效成分缺乏系统性研究。凤丹白花瓣产量很大,每亩可产鲜花约2000 Kg,约为250 Kg干花。本课题比较了凤丹白不同部位中总酚、总黄酮含量以及体外抗氧化性能,对花瓣中黄酮进行了提取、纯化,并对其中黄酮单体进行了结构鉴定,为凤丹白花瓣的基础研究提供科学依据。首先比较了凤丹白不同部位(花瓣、花粉、种皮、根皮)乙醇提取物中总酚、总黄酮含量以及体外抗氧化性能。凤丹白不同部位乙醇提取物中总酚含量具有极显著性差异(P0.01);种皮、花瓣、花粉提取物之间总黄酮含量差异性极显著(P0.01)。以水溶性维生素E(VE)、抗坏血酸(VC)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)、没食子酸丙酯(PG)为对照,选用还原力、DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化活性系数(AAC)为体外抗氧化指标,浓度为1.0 mg/m L时,花瓣乙醇提取物具有良好的体外抗氧化活性。其次,采用传统乙醇提取法(TEE)、超声辅助提取法(UAE)及微波辅助提取法(MAE)研究了凤丹白花瓣总黄酮的提取工艺。结果表明,TEE的最佳提取溶剂为80%乙醇,温度为60℃,料液比(g/m L)为1:60,时间46 min,提取2次;UAE的最适功率为300 W,时间为60 min;MAE的最佳功率为500 W、提取时间100 s,总黄酮得率为(13.77±0.09)mg/g。三种提取方法的总黄酮得率没有显著性差异(P0.05),黄酮类化合物组成相同,但MAE可明显缩短提取时间、提高提取效率。然后,采用大孔吸附树脂对凤丹白花瓣总黄酮进行了纯化。结果表明,聚酰胺具有良好的吸附、解吸性能,适合初步分离纯化花瓣总黄酮。25℃时,Freundlich模型能更好评价聚酰胺对花瓣总黄酮的等温吸附行为;准二级动力学方程更适合描述聚酰胺对花瓣总黄酮的吸附,吸附过程由表面扩散和颗粒内扩散共同影响。聚酰胺柱层析纯化花瓣总黄酮的工艺条件:上样浓度0.75 mg/m L,上样量为1.1个柱体积(BV),上样流速为1 BV/h,依次用4 BV去离子水、6 BV 20%乙醇、7.5 BV 40%乙醇、6 BV 60%乙醇脱、6.5 BV 80%乙醇及5.5 BV 100%乙醇进行梯度洗脱。液质联用分析发现,洗脱液中的黄酮主要为二氢山柰酚、山柰酚、异鼠李素、木犀草素、芹菜素的各种糖苷。最后,采用硅胶柱色谱、Dr FlashⅡ中低压制备液相色谱及Waters 2545制备液相色谱结合,成功从聚酰胺洗脱的20%乙醇组分中分离出两个黄酮单体,纯度分别为98.02%、95.90%。通过质谱、~1HNMR、~(13)CNMR结合分析鉴定,得两个黄酮的结构分别为:山柰酚-3-O-β-D-半乳糖(2→1)-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4’-O-α-L-鼠李糖苷。这两个黄酮单体均为首次从凤丹白花瓣中分离得到。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R284.2

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