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《江南大学》 2018年
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猴头菌粉对小鼠酒精性胃损伤的保护作用及其机制研究

毛湘君芝  
【摘要】:胃损伤是由多种因素共同作用引起的胃部疾病,过量饮酒是其发病的重要因素之一。猴头菌是一种传统的药食两用真菌,主要用于治疗包括胃溃疡、急慢性胃炎在内的消化道疾病。基于猴头菌对胃肠道的保护作用,本课题尝试评价猴头发酵菌粉对急慢性酒精性胃损伤小鼠的作用,并探究其作用机制。主要研究工作如下:(1)探究猴头菌粉对小鼠急性酒精性胃损伤的预防作用。实验以急性灌胃酒精小鼠为模型,给小鼠连续6天灌胃不同剂量的猴头菌粉(125~500 mg/kg),然后单次灌胃无水乙醇造模。观察小鼠胃黏膜出血、水肿、细胞坏死脱落、炎细胞浸润等情况,并检测胃液pH,胃组织中脂质过氧化指标丙二醛(MDA)的变化,炎症因子TNF-α、IL-1β和MPO的mRNA的表达情况,以及炎症相关蛋白Caspase-1、NLRP3、IL-1β、TNF-α和TLR4的含量,探讨猴头菌粉对酒精引起的急性胃损伤的预防效果。结果表明:猴头菌粉能显著改善急性酒精性胃损伤小鼠胃黏膜中出血、溃烂、细胞坏死脱落情况,猴头菌粉低、中、高剂量组胃黏膜组织形态学变化得分与模型组相比分别降低了16.93%、19.52%、42.89%。和模型组相比,猴头菌粉低、中、高剂量组小鼠胃组织中TNF-αmRNA表达量分别下降了49.02%、54.64%、63.10%;IL-1βmRNA表达量分别下降了27.79%、43.87%、48.26%;高剂量组MPO mRNA表达量下降了42.69%。各治疗组小鼠胃组织中炎症相关蛋白Caspase-1、NLRP3、IL-1β、TNF-α和TLR4的含量明显下降(P0.05),且呈一定的剂量依赖性。表明猴头菌粉能显著改善胃黏膜状态,降低胃组织中炎症因子TNF-α、IL-1β和MPO的mRNA表达量;能减少炎症相关蛋白Caspase-1、NLRP3、IL-1β、TNF-α和TLR4的产生,减轻炎症程度。但对胃液pH和MDA的影响有限。(2)探究猴头菌粉对小鼠慢性酒精性胃损伤的治疗作用。实验以慢性酒精喂养加单次大剂量酒精灌胃小鼠为模型,在小鼠饲料中添加低剂量乙醇,连续喂养10天,然后单次灌胃63%乙醇,造模完成后灌胃不同剂量猴头菌粉(0.5~1 g/kg)进行治疗。观察小鼠胃黏膜出血、水肿、细胞坏死脱落、炎细胞浸润等情况,并检测胃组织中炎症因子TNF-α、IL-1β和MPO的mRNA的表达情况,以及炎症相关蛋白Caspase-1、NLRP3、IL-1β、TNF-α和TLR4的含量,探讨猴头菌粉对长期饮用酒精导致的慢性胃损伤的治疗效果。结果表明:猴头菌粉能显著改善慢性酒精性胃损伤小鼠胃黏膜出血、水肿、炎细胞浸润、上皮细胞脱落情况,猴头菌粉低剂量组、高剂量组的组织形态评分比模型组低了63.61%、74.55%;猴头菌粉低、高剂量组TNF-αmRNA的表达量比模型组低45.84%、43.67%;IL-1βmRNA的表达量比模型组低37.59%、34.83%;MPO mRNA的表达量低33.43%、42.16%。表明猴头菌粉能显著改善胃黏膜状态,降低胃组织中炎症因子TNF-α、IL-1β和MPO的mRNA表达量;能减少炎症相关蛋白Caspase-1、NLRP3、IL-1β、TNF-α和TLR4的产生,减轻炎症程度。达到治疗胃损伤的效果。(3)探究猴头菌粉治疗小鼠慢性酒精性胃损伤的机制。提取正常组(CTL)、模型组(ETOH)、猴头菌粉高剂量组(HEH)三组小鼠胃组织中的蛋白质,用iTRAQ蛋白组学技术进行定量检测。通过与数据库的比对,共得到5842个蛋白。将三组蛋白进行两两对比,ETOH vs.CTL、HEH vs.CTL、HEH vs.ETOH分别有308、205、230个差异蛋白。将鉴定得到的蛋白进行GO注释,并将差异蛋白进行富集分析,发现角化作用(keratinization)、上皮细胞分化(epidermal cell differentiation)、角化细胞分化(keratinocyte differentiation)、上皮发展过程(epidermis development)、角质化包膜(cornified envelope)和中间丝(intermediate filament)相关蛋白富集率较高。将蛋白进行KEGG信号通路注释,并将差异蛋白进行富集分析,发现p53信号通路相关蛋白富集率较高,表明此通路可能会影响胃黏膜状态。推测猴头菌粉可能通过影响胃黏膜上皮细胞分化达到治疗慢性酒精性胃损伤的效果。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R285.5

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