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《江南大学》 2018年
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佛手多糖的提取纯化及其对酒精性肝细胞损伤保护作用研究

陈孝云  
【摘要】:佛手[Citrus medica L.var.sarcodactylis(Noot.)Swingle]系芸香科柑橘属植物,《本草纲目》等记载,佛手具有醒酒护肝等功效。多糖是佛手的主要功能成分,课题首先研究不同提取方法对佛手多糖性质的影响,采用响应面优化超声-微波协同提取佛手多糖的工艺,其次纯化获得佛手多糖分级组分,探讨佛手多糖及分级组分对酒精性肝损伤的保护作用,为佛手的深度开发利用奠定理论基础。论文主要内容和结论如下:(1)分别采用传统热水浸提法、超声辅助法、超声-微波协同提取法、微波辅助法和复合酶法提取佛手多糖,探讨不同提取方法对佛手多糖得率、糖醛酸含量、分子量、单糖组成、红外光谱和乙醇脱氢酶活性的影响。结果表明:超声-微波协同提取多糖得率高,可达4.15%;不同方法提取的多糖相对分子量大小存在差异;不同方法提取的多糖均为α-型糖苷键的吡喃型多糖,单糖组成均以阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖为主;超声-微波协同提取多糖对乙醇脱氢酶激活能力最强为46.58%,而传统水提多糖抑制乙醇脱氢酶活性。因此,确定采用超声-微波协同提取法提取佛手多糖。(2)采用Box-Behnken响应面法优化超声-微波协同提取佛手多糖(FCP)工艺条件,研究微波功率、料液比和提取时间对FCP得率的影响,结果表明:微波功率700 W,料液比1:57(g/mL),提取时间910 s,FCP的平均得率为5.68%。与微波提取法和热水浸提法相比,超声-微波协同提取法提取FCP得率分别提高了51.06%和37.86%。(3)将上述FCP除蛋白和脱色后,先经Cellulose DE-52分离获得FCP-1、FCP-2、FCP-3,再采用Sephadex G-200分别对FCP-2和FCP-3进一步分离,获得FCP-2A、FCP-3A。其中,FCP-1、FCP-2A和FCP-3A是均一多糖,苯酚硫酸法测得多糖纯度分别为82.7%、86.5%和88.4%。再分别进行超滤离心,三种多糖的纯度分别提高至88.6%、91.7%和93.6%。采用高效凝胶过滤色谱法、高效离子色谱法、红外光谱、糖醛酸含量来分析上述均一多糖,结果表明:FCP-1、FCP-2A和FCP-3A的重均分子量分别为1.96×10~4 Da、1.47×10~5Da和2.06×10~5 Da;FCP-2A和FCP-3A均由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖组成,FCP-1由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成;三种多糖均为吡喃型多糖,FCP-1含有α-D-半乳糖,FCP-2A含有α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖,FCP-3A含有α-D-葡萄糖。FCP-1,FCP-2A和FCP-3A的糖醛酸含量分别是5.20%,23.01%和29.54%。(4)从体外抗氧化活性、对乙醇脱氢酶活性影响和对体外酒精性肝细胞损伤保护这三个方面对佛手多糖及分级组分的护肝活性进行了研究。在体外抗氧化活性方面,由于酒精性肝损伤的主要机制是氧化应激,故以清除DPPH自由基、ABTS自由基和还原力为抗氧化能力测定指标,研究FCP及分级组分的体外抗氧化活性。结果表明,抗氧化能力强弱次序为:FCP-3AFCP-3FCPFCP-1FCP-2AFCP-2。在乙醇脱氢酶活性方面,当多糖浓度为1.0 mg/m L~10.0 mg/m L时,FCP及分级组分对ADH均表现为激活作用,激活强弱次序为:FCP-2AFCP-2FCPFCP-3AFCP-3FCP-1。在体外酒精性肝细胞损伤方面,以存活率为20%的酒精性损伤HepG2细胞作为模型组,以细胞存活率、谷草转氨酶含量、谷胱甘肽含量、超氧化物歧化酶含量和丙二醛含量为评价指标,探讨FCP及分级组分对体外酒精性肝细胞损伤的保护作用。研究表明:当多糖浓度37.5μg/mL~150.0μg/m L时,FCP及分级组分对体外酒精性肝细胞损伤均具有保护作用,其中FCP-3和FCP-3A的保护作用最强。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R285.5

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