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灵芝酸发酵及抗慢性支气管炎活性的研究

王林  
【摘要】:目前国外对灵芝酸的开发已做了大量的工作。这些产品有不少是采用深层发酵技术制造而成,可见灵芝深层发酵法生产具有很大的优势,因此进一步提高目标产物产量,降低成本是有关学者非常感兴趣的研究课题。本论文以pH控制发酵提高灵芝酸产量为出发点,并对灵芝酸pH控制发酵、提取工艺、分离纯化、结构鉴定和灵芝酸类物质抗慢性支气管炎活性进行了研究。 发现了胞外灵芝酸的形成与菌丝体生长呈部分偶联型,胞内灵芝酸的形成与菌丝体生长呈偶联型,胞外灵芝酸产量远远高于胞内灵芝酸。 研究了灵芝酸分阶段pH控制发酵新工艺。灵芝酸产量比自然发酵工艺提高了26.5%。 研究了胞内外灵芝酸提取工艺的优化。通过响应面分析(RSA)优化了胞内灵芝酸的提取工艺,温度:91.6℃,水提时间:4小时,料:水比1:2.4。此时灵芝酸提取率最高,达到0.291g/kg湿菌体。 研究了洗脱剂组成、进样量、柱规格以及洗脱剂流速对硅胶柱层析分离纯化灵芝酸性物质效果的影响。分离纯化灵芝酸性物质的条件为:CHCl3:CH3OH=90:10,95:5,98:2三种洗脱剂组成梯度洗脱,样品量:硅胶量=1:45,层析柱规格40×500mm,洗脱剂流速0.9 ml·min-1。 在上述条件下,分离得到5种灵芝酸类物质,分别命名为S1、S2、S3、S4、S5。 通过紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振技术对灵芝酸S3的结构进行了分析,初步确定了其结构属于四环三萜酸,分子量为476,分子式为C27H40O7,并推测出其结构,其结构属于类型4。 通过小鼠药效学实验证明灵芝酸性物质在抗小鼠呼吸系统炎症方面有显著的疗效。 金银花,连翘,麻黄,莱菔子与灵芝发酵液在抗小鼠呼吸系统炎症方面有一定的疗效。


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