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《江南大学》 2004年
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抗幽门螺杆菌蛋黄抗体的制备及其研究

聂作明  
【摘要】:本文研究了抗幽门螺杆菌蛋黄抗体IgY-HP的制备方法。幽门螺杆菌HP超声波粉碎离心后的上清液和HP尿素酶混合抗原物免疫蛋鸡,对蛋黄中的IgY-HP进行了分离纯化,并测定了IgY-HP的生物活性及功能性质。 通过对幽门螺杆菌培养优化的研究,最终确定了培养基采用哥伦比亚加血培养基,培养条件为:5%O2、85%N2、10%CO2,并通过抽气换气法达到所需培养环境。经鉴定,HP单个菌体典型形状为螺旋弯曲状,有时有短杆和球状出现。快速尿素酶测试呈阳性反应,革兰氏染色证实其为革兰氏阴性菌。 试验采用超声破壁法粗提了HP中的主要抗原物质—尿素酶。采用离子交换凝胶层析法纯化粗尿素酶样品,得到了较高纯度的尿素酶,酶蛋白总回收率为3.05%,所纯化尿素酶比酶活为81.491 U/mg;采用离子交换杂蛋白吸附法也可得到一定纯度的尿素酶,酶蛋白总回收率为3.88%,所纯化尿素酶比酶活为87.351U/mg。经SDS-PAGE鉴定,尿素酶A、B两种亚基分子量分别为64000和31000。 应用幽门螺杆菌超声粉碎抗原和尿素酶抗原制成的混合抗原对蛋鸡进行免疫后,通过水稀释法结合超滤粗提蛋黄中的IgY-HP,得率为3.2%,然后通过硫酸铵沉淀和离子交换色谱分离纯化IgY-HP,其中硫酸铵沉淀后样品IgY纯度达到84.3%,离子交换层析后样品IgY纯度达到97.3%。 经ELISA法测定,和一般IgY相比,IgY-HP的抗HP和抗尿素酶效价分别提高了32倍和16倍。 对IgY的耐热、耐酸试验表明:pH对IgY-HP活性的影响和温度有关,温度越高,IgY-HP的耐酸能力越差。在37℃下,pH4.0时IgY-HP开始失活,当pH从4.0下降至3.0时,活性损失大约60%~80%,至pH2.0时,已基本全部失活。IgY-HP模拟胃消化的实验表明IgY-HP耐胃蛋白酶的能力与pH有关。当pH为2.0时,IgY-HP经胃蛋白酶作用后,活性几乎全部失活,而pH为4.0和6.0时,胃蛋白酶对IgY活性无显著性影响。 IgY-HP口服所产生的被动免疫效果使得其有望应用于食品保健或各种HP相关胃病的抗菌免疫治疗中。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:TS201

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