收藏本站
《江南大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

草菇cDNA削减文库的构建及三种多聚糖降解酶基因的克隆与表达

李迅  
【摘要】:食用菌能够利用废弃的木质纤维素类物质作为生长基质,通过生物转化将其转变为具有较高附加值的食品或药用子实体。草菇(Volvariella volvacea)主要生长在热带和亚热带地区,是世界第五大食用菌培育品种。它以稻草等秸秆为生长基质,生长温度比其它中温真菌高,这些特性显示其纤维降解酶系可能具有更好的温度稳定性。本文的研究内容是构建草菇cDNA削减文库,为建立高等担子菌基因高效表达体系提供有力的基因工程方面的支持;克隆一些有价值的多糖降解酶,并对它们的外源表达进行探讨。 1.首先确定草菇中半纤维素酶和纤维素酶最佳mRNA丰度的诱导条件为:xylan和CMC各0.2%;(NH_4)_2SO_4 0.2%;KH_2PO_4 0.2%;VB1 2.5 mg/L;MgSO_4 0.1%;pH 7.5;150 rpm的转速培养。改进了担子菌草菇的总RNA抽提方法,用此方法获得的RNA满足了后继的cDNA合成需要。介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入的方法构建全长cDNA削减文库,分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取mRNA,由PowerScript~(TM)逆转录酶将诱导菌丝提取的mRNA逆转录成cDNA第一链,用得到的cDNA第一链和非诱导菌丝提取的过量mRNA进行杂交,将未杂交上的cDNA第一链洗脱浓缩后,用SMART~(TM) cDNA Library Construction试剂盒构建成草菇cDNA削减文库。经检测:原始文库滴度为2.5×10~5 pfu/ml,重组率为93%,插入cDNA大小在0.5~4.0 kb之间,文库扩增后,文库滴度为1.1×10~9 pfu/ml。 2.首次发现草菇中木聚糖酶基因的mRNA大规模异常剪辑现象,发生了内含子错读或外显子错误剪辑,形成不正常的mRNA。这可能是草菇适应环境一种调节方式,来满足
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q78;S646.13

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 刘朋虎;邓优锦;江玉姬;谢宝贵;;草菇PGAM基因克隆、结构及其在同核、异核菌株中的表达量分析[J];福建农业学报;2012年03期
2 刘朋虎;谢宝贵;邓优锦;陈炳智;贵甫;朱坚;江玉姬;刘新锐;;草菇gpi基因结构及其异核体表达协同增效作用[J];食用菌学报;2011年04期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 刘朋虎;草菇同核、异核菌株间差异基因表达的研究[D];福建农林大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张智清,姚立红,侯云德;含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用[J];病毒学报;1990年02期
2 孟祥文,李璞;构建消减文库的方法与策略[J];国外医学.遗传学分册;1994年03期
3 刘永生,冯家勋,段承杰,莫新春,柏学亮,张成刚,唐纪良,马庆生;能降解天然纤维素的地衣芽孢杆菌GXN151的分离鉴定及其一个纤维素酶基因(cel5A)的克隆和测序分析[J];广西农业生物科学;2003年02期
4 钟穗生;纤维素原料预处理技术新发展[J];化工进展;1989年05期
5 冯骆,王秀琴,傅明,王志华,田园,蔡岩,吴旻;从人食管癌细胞系分离分化基因的新方法[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1991年10期
6 李明春,王俊琦,邢来君;丝状真菌深黄被孢霉RNA的提取方法[J];菌物系统;1999年01期
7 刘家健,陆怡;预处理对纤维素酶降解影响的研究[J];林产化学与工业;1995年03期
8 邬敏辰,李江华,邬显章;黑曲霉纤维素酶的特性研究[J];山西食品工业;1997年04期
9 阎伯旭,高培基;纤维素酶的底物专一性[J];生命科学;2000年02期
10 陈瑞娟;新型低聚糖的介绍[J];食品与发酵工业;1993年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李广存,杨煜,王秀丽,高昌勇,陈利容,张斌,毕玉平,王毅;马铃薯Y病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达[J];山东农业科学;2003年01期
2 陈炳才,薛王进;平菇新品种宜95-3的选育[J];安徽农业科学;2000年02期
3 邓百万,陈文强;海藻酸钠包埋保藏对食药用菌种活性的影响[J];安徽农业科学;2005年03期
4 陈封政;李书华;向清祥;;濒危植物桫椤不同部位化学组分的比较研究[J];安徽农业科学;2006年15期
5 王谦;付强;卢朝亮;齐玲娣;;几种培养基对褐口蘑菌丝生长的影响[J];安徽农业科学;2007年04期
6 龚拯;周国英;周德明;;双孢蘑菇单孢分离与单孢杂交研究进展[J];安徽农业科学;2007年07期
7 吴窈画;彭惠;邵蔚蓝;;结晶纤维素降解酶的研究进展[J];安徽农业科学;2007年09期
8 谷嵩;刘昱辉;;纤维素酶的研究进展[J];安徽农业科学;2007年25期
9 瞿新华;;植物精油的提取与分离技术[J];安徽农业科学;2007年32期
10 辛健康;薛泉宏;;毛壳菌纤维素酶活及发酵产物蛋白质含量测定[J];安徽农业科学;2007年33期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 粟本文;赵熙;黄怀生;郑红发;银霞;钟兴刚;刘淑娟;;绿茶总黄酮提取方法及其对羟自由基清除效果研究[A];科技创新 转型升级 做大做强湖南特色茶叶——湖南省茶叶学会2011年学术年会论文集[C];2011年
2 李志强;史威威;慕亚卿;潘玉兰;;饲用玉米不同收获期纤维含量变化动态研究[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
3 邬敏辰;张慧敏;唐存多;李剑芳;;木聚糖酶固态发酵培养基的优化[A];饲用酶制剂开发与应用技术交流研讨会论文集[C];2010年
4 钟淮钦;陈源泉;黄敏玲;林兵;叶秀仙;吴建设;;小苍兰花色色素成分及稳定性分析[A];2009中国球根花卉年会交流论文集[C];2009年
5 肖维强;黄桂颖;戴宏芬;陈悦娇;黄炳雄;马应丹;王晓容;;RP-HPLC法测定水果中蛇麻醇酯含量方法的初步研究[A];科技与创新——广东园艺科技论文集(广东省园艺学会第九次会员大会暨学术研讨会论文集)[C];2010年
6 赵祥杰;邝哲师;叶明强;罗国庆;肖更生;;一株蚕蛹壳几丁质降解菌的分离与初步鉴定[A];中南五省区蚕桑育种协作研讨会论文集[C];2009年
7 魏巍;贺淹才;刘爱花;;几丁质酶酶活测定方法的研究进展[A];第三届全国工业催化技术及应用年会论文集[C];2006年
8 杨勤兵;贾自力;;不同树龄白果中营养成分的比较分析[A];北京市营养学会第四届会员代表大会暨膳食与健康研讨会论文集[C];2010年
9 高莉莉;陈东辉;陈亮;;低聚壳聚糖的制备及其在医药中的应用[A];上海市化学化工学会2005年度学术年会论文摘要集[C];2005年
10 姚强;黄琰;陈冠军;;产耐碱性纤维素酶丝状真菌的筛选及研究[A];山东微生物学会第六次会员代表大会暨2004年学术年会论文集(上)[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
2 张婕;嗜热真菌热稳定几丁质酶基因的克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
3 刘杰;生物降解聚酯作为抗癌药物和基因载体的研究[D];华中科技大学;2010年
4 刘东;苏云金芽孢杆菌几丁质酶特性分析及其基因启动子序列的确定[D];南开大学;2010年
5 肖亮;地衣芽孢杆菌MY75几丁质酶特性及表达调控元件的研究[D];南开大学;2010年
6 钟辉;壳聚糖增强重组腺病毒转导效率及口服免疫效果初步研究[D];北京协和医学院;2009年
7 朱汇源;木聚糖诱导条件下黑曲霉特异基因表达分析及高表达碱性木聚糖酶产黄青霉菌株构建研究[D];山东大学;2010年
8 潘飞;啤酒厂剩余污泥堆肥高效菌群构建及其新型堆肥工艺研究[D];东华大学;2010年
9 周亚福;几类植物分泌结构发育过程中的细胞程序性死亡研究[D];西北大学;2011年
10 咸洪泉;菌寄生真菌几丁质酶基因的克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡慧磊;产聚半乳糖醛酸酶菌株的筛选、发酵条件及酶学性质的研究[D];华中农业大学;2010年
2 董俊丽;深海细菌Martelella mediterranea纤维素酶基因的克隆、表达与酶学分析[D];华中农业大学;2010年
3 赵茜;蛇床子素配伍植物筛选[D];华中农业大学;2010年
4 王美花;里氏木霉swollenin在米曲霉中的表达和纯化[D];浙江理工大学;2010年
5 孙士强;人脐带间充质干细胞修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究[D];郑州大学;2010年
6 于清伟;大杯蕈优良菌株筛选与栽培技术研究[D];山东农业大学;2009年
7 陶聪;枣庄市食用菌产业的现状和发展对策[D];山东农业大学;2009年
8 刘尧;玉米秸秆腐解复合菌系CSS-1的构建、菌群组成及腐解特性研究[D];山东农业大学;2010年
9 桂春燕;耐盐碱产纤维素酶芽孢杆菌的选育及酶学特性的研究[D];山东农业大学;2010年
10 赵青;葡萄种质资源根瘤蚜抗性差异及其与根系次生代谢物质的关系[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王杰;林俊芳;郭丽琼;;草菇gpd启动子的克隆及表达载体的构建[J];安徽农业科学;2009年34期
2 钟江华;张光萍;柳小英;;实时荧光定量PCR技术的研究进展与应用[J];氨基酸和生物资源;2011年02期
3 温海祥,肖洪东,黄剑波,温玉辉,任吉君;草菇种内原生质体融合育种研究[J];北方园艺;2000年03期
4 谢宝贵,羿红,黄志龙,林友照,谢福泉,江玉姬;草菇杂交育种及同工酶分析[J];福建农业大学学报;2001年03期
5 江玉姬,谢宝贵,陈文校;草菇DNA提取方法初探[J];福建农业学报;2000年02期
6 王杰;林俊芳;云慧芬;张凯;郭丽琼;;草菇原生质体制备、再生及转化研究[J];华南农业大学学报;2007年03期
7 王杰;林俊芳;郭丽琼;;影响农杆菌介导草菇遗传转化的因素研究[J];华南农业大学学报;2010年01期
8 滕晓坤;肖华胜;;基因芯片与高通量DNA测序技术前景分析[J];中国科学(C辑:生命科学);2008年10期
9 吴佳妍;肖景发;张若思;于军;;DNA测序技术引领中国基因组科学走向未来[J];中国科学:生命科学;2010年12期
10 张濛,贾新成,陈明杰;草菇低温诱导蛋白研究初探[J];菌物系统;2000年04期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 傅俊生;草菇遗传规律研究[D];福建农林大学;2010年
2 王斌;基于RNA-Seq技术的米曲霉RIB40转录组学研究[D];华南理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 王海英;草菇不同发育时期菌柄基因表达谱差异初步分析[D];福建农林大学;2011年
2 黄桂英;真姬菇低温胁迫下菌丝体酶活变化及差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2008年
3 黄碧芳;不同温度对虎奶菇胞内胞外蛋白差异表达的影响[D];福建农林大学;2008年
4 黄家保;小菜蛾取食诱导的菜心mRNA表达谱及差异表达基因克隆[D];福建农林大学;2010年
5 孔庆芳;草菇SCAR标记遗传连锁群的建立[D];福建农林大学;2010年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘朋虎;邓优锦;江玉姬;谢宝贵;;草菇PGAM基因克隆、结构及其在同核、异核菌株中的表达量分析[J];福建农业学报;2012年03期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张智清,侯云德,李玉英,赵小侠,周园,段淑敏,姚立红;应用P_RP_L串联启动子和CIts857调控基因高效表达人γ干扰素[J];病毒学报;1988年02期
2 张英,张鹏,赵裕蓉;液体发酵法转化纤维素的研究[J];北京化工学院学报(自然科学版);1994年03期
3 冯雁,靳小红,李增吉,曹淑桂,程玉华;高分子添加剂对纤维素酶糖化力的影响[J];高等学校化学学报;1991年09期
4 谭东;木质素的提取及应用[J];广西化工;1994年04期
5 高修功,章克昌;纤维素酶固态发酵过程中菌体生长量的测定[J];工业微生物;1994年03期
6 金建中,李宗林,龚郁彬,胡乔贤,任大明,李道棠,黄瑞珊,吴其威,杨韵,许洪昌;酵母菌和食用真菌混合固态发酵配合蛋白饲料的应用研究[J];工业微生物;1994年04期
7 刘洁,李宪臻,高培基;纤维素酶活力测定方法评述[J];工业微生物;1994年04期
8 邱立友,刘诗鹏,吴华军,胡渝;纤维素酶产生菌和糖化酶产生菌液体混合发酵的研究[J];工业微生物;1995年02期
9 梁锋;李德深;罗梦奎;;纤维素的溶胀与溶解[J];广州化工;1987年04期
10 钟穗生;纤维素原料预处理技术新发展[J];化工进展;1989年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 鲍鸣,仲大莲,许发芝,余为一,李槿年;鸡γ-干扰素基因的克隆与原核表达[J];安徽农业大学学报;2004年01期
2 张治平,李元;鼠Ⅰ型可溶性白细胞介素1受体基因在昆虫细胞的克隆和表达[J];遗传学报;1999年01期
3 袁哲明,孟小林,刘树生;粉纹夜蛾颗粒体病毒增效基因3′端2.5kb片段在大肠杆菌中的表达[J];昆虫学报;2001年02期
4 孟学平,付宝权,卢强,吴秀萍,王锋,牛廷献,黎诚耀,刘明远,P.Boireau;旋毛虫FYVE锌指结构蛋白基因的克隆及表达[J];中国兽医科技;2001年12期
5 曹秋芬,和田雅人,孟玉平,黄静,孙毅,王果萍;苹果LEAFY同源基因的cDNA克隆与表达分析[J];园艺学报;2003年03期
6 张焕玲,钱建飞,侯艳红,李银,郝勤宗,裘教宗,张则斌,陈溥言,杨奎;法氏囊活性肽在大肠杆菌中的克隆与表达[J];中国预防兽医学报;2003年01期
7 戴建华,秦爱建,许金俊,刘岳龙,金文杰;鸡γ-干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达[J];中国预防兽医学报;2003年04期
8 尤永进,朱彩珠,葛艳,陈波,张强,饶忠,徐泉兴,卢永干;口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达[J];中国病毒学;2003年02期
9 郭锡杰,金勇丰,杨明观,张耀洲;家蚕核型多角体病毒酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达[J];病毒学报;2001年03期
10 沈斌,高荣,孟民杰,王克非,魏竹波,刘世贵;猪囊尾蚴抗原基因Ts11的克隆及其在大肠杆菌的表达[J];畜牧兽医学报;2001年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 滑世轩;岑东;吕建新;裴仁治;;NK4基因的克隆及在Raji细胞中的表达[A];第二届中国医学细胞生物学学术大会暨细胞生物学教学改革会议论文集[C];2008年
2 鲁会军;韩松;郑敏;李旭;李昌;金扩世;金宁一;;口蹄疫病毒泛亚株VP1基因的克隆与原核表达[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
3 李念;胡国库;张义正;冯红;;黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)环氧化物水解酶的克隆及酶学性质分析[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
4 毕佳佳;梁卫红;;OsMPK14基因与水稻非生物胁迫应答有关[A];中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术研讨会论文摘要汇编[C];2009年
5 陈佳;王春仁;;东毕吸虫信号蛋白14-3-3基因的克隆与表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
6 郑宇;马兴元;魏东芝;赵莉;宫衡;;克雷伯氏菌甘油脱氢酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
7 武鸿;梅乐和;;嗜热脂肪芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及特点的研究[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
8 王利;唐懿挺;;牦牛同种移植炎症因子AIF-1的克隆和表达分析[A];第四届中国畜牧科技论坛论文集[C];2009年
9 白晓东;刘晓晴;;一种新的来源于Thermus thermophilus HB8嗜热菌蛋白在大肠杆菌中的表达及功能分析[A];第九届全国酶学学术讨论会暨邹承鲁诞辰85周年纪念会论文摘要集[C];2008年
10 徐立新;袁橙;严若峰;宋小凯;李祥瑞;;山羊IFN-γ基因的克隆与表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘红明;夏季草菇栽培新法[N];山西科技报;2004年
2 ;草菇生长发育需要哪些环境条件?[N];东方城乡报;2009年
3 张丽英;草菇栽培技术落户高平[N];太行日报;2010年
4 ;夏闲棚室不妨栽培草菇[N];吉林农村报;2009年
5 靖江市农委供稿;加强熟地草菇栽培管理[N];江苏农业科技报;2010年
6 光合;玉米地里套草菇 结构调整增收入[N];山西科技报;2000年
7 张子琴;栽草菇爱闹啥病[N];河北科技报;2002年
8 廖木林;难舍草菇情[N];中国特产报;2000年
9 刘雪琼 孙育红 张军;夏季栽培草菇注意防治病虫害[N];江苏农业科技报;2011年
10 薛玉华;草菇增产新三法[N];山西科技报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李迅;草菇cDNA削减文库的构建及三种多聚糖降解酶基因的克隆与表达[D];江南大学;2005年
2 樊东;几种鳞翅目昆虫几丁质酶基因的克隆与表达研究[D];东北农业大学;2004年
3 邹克琴;苹果钙依赖蛋白激酶MdCPK1:分子克隆、表达、定位及被脱落酸的激活[D];中国农业大学;2005年
4 康巧珍;幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白基因克隆表达及免疫评价[D];郑州大学;2005年
5 张焱如;马生长激素(GH)基因序列、分子进化及其多态性的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
6 李敏;牛免疫球蛋白重链基因中JH,Eμ片段敲除的研究和JH,Cμ基因的分析[D];中国农业大学;2005年
7 隋正红;龙须菜藻红蛋白基因的研究[D];中国海洋大学;2001年
8 郭润芳;疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶纯化及其编码基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2005年
9 杜晓惠;鸡多趾候选基因的SNPs及表达差异研究[D];四川农业大学;2005年
10 张运雄;欧文氏杆菌CXJZ95-198非纤维素降解特性及manA基因的克隆研究[D];中国农业科学院;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张晓元;纤维堆囊菌So9733-1木聚糖酶基因的克隆、表征与异源表达分析[D];山东大学;2005年
2 胡晓航;银狐生长激素基因克隆与基因表达研究[D];东北林业大学;2005年
3 郭焕成;产纳豆激酶菌株的筛选及纳豆激酶酶原基因的克隆与表达研究[D];吉林大学;2005年
4 刘茜;水稻蛋白激酶的克隆及体外表达[D];河北农业大学;2005年
5 邱重晏;酸性蛋白酶基因的克隆及表达[D];江南大学;2005年
6 孙树民;旋毛虫肌幼虫p53 kDa和p45 kDa抗原基因的克隆、表达及鉴定[D];吉林大学;2006年
7 柯晓静;黑曲霉WP1植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D];河北农业大学;2007年
8 李旺;耐热纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及纤维素酶基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2007年
9 万修红;镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆及表达[D];上海师范大学;2007年
10 任燕;致病性嗜水气单胞菌的检测与一种温敏胞外蛋白酶基因的克隆、表达及其免疫性研究[D];南京农业大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026