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《江南大学》 2006年
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产氨基酰化酶菌株的选育及发酵条件的优化

李建涛  
【摘要】: 本研究所使用的米曲霉L-09(Aspergillus oryzae L-09)是通过紫外线诱变,经纸层析法初筛和亚硝基胍诱变,选育得到的一株氨基酰化酶产生菌株。紫外诱变后获得的菌株比出发菌产酶能力提高了60%,然后用亚硝基胍点试平板法诱变,酶活进一步提高了30.5%。在30℃条件下,培养2d,酶活可达到539.7U/g干曲。 在研究营养条件和培养条件对L-09菌株产酶影响中发现:碳氮源、促进剂、培养基的料水比对L-09菌株产酶都有影响;发酵温度、发酵时间、接种量、pH对L-09菌株产酶也有影响。最佳营养条件和培养条件为:麸皮、豆饼粉比为8.0: 2.0,麦芽糖5g/L,吐温-80 5g/L,植酸0.5g/L,料水比为1: 1,pH7.0,在30℃下,发酵48h,酶活可达1254.4 U/g干曲。 研究鲜曲的浸提条件,实验结果表明:以1: 10的固液比向鲜曲中加入pH 7.0、0.1mol/L磷酸缓冲液,于40℃,在100r/min振荡条件下,浸提时间2 h为佳。 对氨基酰化酶纯化研究,采取二次盐析,先采用30%饱和度的硫酸铵盐析,除杂蛋白,然后再采用70%饱和度的硫酸铵盐析,经透析除盐,浓缩,得到酶液。 氨基酰化酶的酶学性质研究:最适pH 7.0,最适反应温度为55℃,最适底物浓度200mmol/L,Co~(2+)对酶活有激活作用,高浓度底物对酶有抑制作用,产物醋酸根对酶有较强的抑制,酶的保存半衰期为104d。37℃游离酶的动力学参数:K_m=30.49(mmol/L),Vmax=3.94(μmol/min);55℃游离酶的动力学参数:K_m=33.3 (mmol/L),Vmax=7.93(μmol/min)。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:TQ920.1

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