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《江南大学》 2008年
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Geotrichum sp. SYBC WU-3产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究

王蕾  
【摘要】: 脂肪酶作为一种重要的工业用酶,已经在工业中得到广泛的应用;筛选新的脂肪酶资源并研究其酶学性质对于其特殊应用具有一定意义。 论文从自然界中筛选得到一株产脂肪酶的微生物,通过形态鉴定,确定其为地丝菌属,定名为Geotrichum sp. SYBC WU-3。 论文研究了诱导剂和表面活性剂对Geotrichum sp. SYBC WU-3脂肪酶产生的影响。结果表明,三丁酸甘油酯、橄榄油、坚果复合油、吐温20、吐温80和乳化剂OP的加入可以促进Geotrichum sp. SYBC WU-3产生脂肪酶,当同时在培养基中加入坚果复合油和乳化剂OP或橄榄油和乳化剂OP时,可以诱导Geotrichum sp. SYBC WU-3产生一新的脂肪酶同工酶LIP-1,而组成型为LIP-2。 采用单因素法和正交实验对Geotrichum sp. SYBC WU-3摇瓶培养基进行了优化,优化后的培养基为:蛋白胨5 g/L,酵母膏6 g/L,NaH_2PO_4 3 g/L,坚果复合油250 mL/L,乳化剂OP 25 mL/L;培养温度30℃,发酵时间72 h;脂肪酶活性较优化前(3.68 U/mL)提高了3.2倍。 采用DEAE-离子层析、Sephadex G-100凝胶过滤及双水相萃取等方法分别纯化了Geotrichum sp. SYBC WU-3脂肪酶同工酶LIP-1、LIP-2。LIP-1较Geotrichum sp. SYBC WU-3脂肪酶粗酶纯化了15.6倍,回收率为11.15 %;LIP-2较Geotrichum sp. SYBC WU-3脂肪酶粗酶纯化了22倍,回收率为17.9 %。 LIP-1、LIP-2均为低温碱性脂肪,在50 mmol/L pH 7.0 Tris-HCl缓冲液中以p-NPB为底物测定的最适反应pH均为9.5,在50 mmol/L pH 3.0-9.0范围Tris-HCl的缓冲液中表现比较稳定;最适作用温度分别为20℃、15℃;LIP-1在40℃以下性质稳定,在50℃的环境中失活迅速;LIP-2在40℃的环境中失活迅速。LIP-1对长链脂肪的水解能力较强,LIP-2对短链脂肪的水解能力强。
【学位授予单位】:江南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:TQ925.6

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【参考文献】
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