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酞酸酯类药物残留分析方法的研究

徐丽广  
【摘要】: 酞酸酯是一类环境激素。它干扰生物体内保持平衡并调节生长过程的激素正常的产生、释放、转移、代谢、反应和消除,或引起生物后代不健康的影响和内分泌功能的改变。 免疫检测技术是国内外小分子快速检测的重要领域之一。本文针对邻苯二甲酸二辛酯的结构设计、合成了一种半抗原,并制备得到了一种抗原。用原料4-硝基邻苯二甲酸经过与正辛醇进行酯化反应,得到4-硝基邻苯二甲酸二辛酯。通过将苯环上的硝基还原形成苯环上具有氨基的半抗原,用重氮化法将此氨基偶联到载体蛋白牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原(DOP-BSA),用重氮化法将此氨基偶联到载体蛋白卵清蛋白(OVA)作间接ELISA反应的包被原(DOP-OVA)。用紫外/可见分光光度计对合成的人工抗原进行鉴定,与半抗原和偶联物、蛋白的扫描结果进行比较,结果显示偶联物具备半抗原和蛋白的双重特征吸收峰,因此可以判断偶联成功,并估算免疫原和包被原的偶联比分别为18和7.5。 用上述合成的人工免疫抗原(DOP-BSA)免疫两只新西兰大白兔,制备出抗血清,效价依次为48000、12000,针对与半抗原结构最相似的邻苯二甲酸二辛酯,建立间接竞争ELISA检测方法并对包被时间、封闭时间、抗体的工作量、标准品稀释液甲醇含量、竞争时间、显色时间等条件进行优化。包被原的稀释倍数为1600,抗体工作浓度为血清稀释4000倍,IC50为19.2ng/mL,检测限为1.9ng/mL,线性范围为5-75ng/ml,并在此条件对3种酞酸酯和类似物进行交叉反应试验,达到对邻苯二甲酸二辛酯残留快速检测的要求。 确立聚氯乙烯中9种酞酸酯残留的HPLC-ESI-MS/MS检测方法。其针对DMP、DEP、DBP、DPP、BBP、DCHP、DEHP、DOP、DIDP的检测限(LOD)分别为:15、7、20~50、5、5、5、20、15、9μg/kg。 ELISA和HPLC-ESI-MS-MS两种方法对DOP的检测结果具有一致性且相关性达到了0.998.


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