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《南京林业大学》 2007年
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杨树原生质体分离及电融合技术体系的研究

郭传敏  
【摘要】: 本文以南林895杨(Populus×euramericana cv‘Nanlin895’)、转Bt基因南林895杨和银白杨(P. alba)为材料,在建立悬浮细胞系及植株再生的基础上,开展杨树原生质体分离和电融合研究,筛选适合杨树的原生质体分离与纯化、原生质体电融合及杂种筛选和培养等条件、方法。旨在为杨树体细胞杂交种质创新研究提供实验依据。主要研究结果如下: 1.幼嫩茎段较适合诱导愈伤组织。愈伤诱导培养基为:MS+2,4-D 2mg/L。将诱导出的愈伤组织转入愈伤继代培养基:MS+2,4-D 2mg/L+ KT 0.2mg/L,经4~5次继代培养后获得淡黄色、结构疏松的胚性愈伤组织,将其转入液体培养基:MS+2,4-D 2mg/L +NAA 0.2mg/L+KT 0.1mg/L+水解酪蛋白500mg/L,建立杨树悬浮细胞系; 2.南林895杨和转Bt基因南林895杨愈伤组织最适合芽诱导培养基为:MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L;芽增殖培养基为:MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.2mg/L;生根培养基为:1/2MS(大量元素减半)。银白杨愈伤组织最适合芽诱导培养基为:MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L + TDZ 0.002mg/L;芽增殖培养基为:MS+6-BA 0.25mg/L+KT 0.25mg/L+TDZ 0.001mg/L;生根培养基为:1/2MS+IBA 0.2mg/L; 3.杨树叶肉原生质体分离的最佳条件为:酶液:纤维素酶(Cellulase R-10) 1% +纤维素酶(Cellulase RS) 1% +果胶酶(Pectolyase Y-23) 0.5% +甘露醇0.6mol/L,28℃,黑暗条件下54rpm轻摇振荡酶解。南林895杨、转Bt基因南林895杨叶片需酶解10h,而银白杨叶片酶解时间为14h,可获得纯度及活力高的杨树原生质体; 4.杨树悬浮细胞系原生质体分离的最佳条件为:酶液:纤维素酶(Cellulase R-10) 1% +纤维素酶(Cellulase RS) 1% +果胶酶(Pectolyase Y-23) 0.3% +甘露醇0.7mol/L,28℃,黑暗条件下54rpm轻摇振荡酶解10h; 5.杨树原生质体纯化采用2次漂浮离心法,首先800rpm下离心4min,然后400rpm下离心8min,纯化效果较好; 6.杨树原生质体融合较适合的电场参数为:AC强度100 V/cm,AC持续时间40s,DC强度1000V/cm,DC持续时间50μs,4次脉冲,2次循环; 7.融合亲本之一原生质体在融合前经UV照射处理6min,活力降低,细胞停止分裂,与另一亲本融合,结合融合亲本的抗生素标记可作为融合杂种筛选培养的有效方法; 8.原生质体在培养基:改良MS +2,4-D 2mg/L+NAA 0.5 mg/L +KT 0.5 mg/L+葡萄糖0.5mol/L中进行液体浅层培养,培养7d后,观察到了杂种融合体第一次分裂。
【学位授予单位】:南京林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S792.11

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【引证文献】
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7 郭久辉 杨兆瑞;中国农民让寻常杨树披“红装”[N];新华每日电讯;2011年
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5 付士磊;干旱胁迫下外源NO对杨树气孔运动及其抗旱性的影响[D];沈阳农业大学;2004年
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