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《南京林业大学》 2008年
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青钱柳离体快繁及生根机理的初步研究

王莹  
【摘要】： 青钱柳[Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja]集药用、保健、材用、观赏等多种功效于一体,具有很高的开发价值,但是自然更新困难,开发利用受到严重制约。本课题选择了青钱柳四个种源(其中三个单株)离体胚作为外植体,系统建立了由离体胚培养到生根诱导的整个技术体系,并以子叶作为试料对生根机理进行了探讨。本研究旨在建立快速、高效的青钱柳组培快繁体系,为工厂化育苗提供理论依据。现将本研究主要结论与成果总结如下: (1)比较了不同培养基中离体胚生长情况,结果表明添加蔗糖20g/L的琼脂白培养基显著提高了离体胚的萌发率(82.33%)。此培养条件下种源间离体胚质量差异较大:06庐山1~#成苗率最好,为72.66%;06剑河3~#和06云南4~#其次,成苗率44.00%、39.33%;06鹤峰种源最差,仅17.33%。 (2)据离体胚培养的结果和试验基数的要求,选择06庐山1~#、06剑河3~#、06云南4~#做进一步的丛生芽诱导增殖试验。初代与继代培养的结果证实了不同种源长势上的差异。初代培养兼顾丛生芽诱导率与增殖系数,继代培养以增殖系数和苗高作为考察对象。试验结果表明6-BA0.5～1.0mg/L+IBA0.01mg/L是适合初代、继代培养的最佳激素组合。06剑河3~#在6-BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L组合下丛生芽诱导率100.00%,增殖系数6.08,苗高3.87cm;06庐山1~#与06云南4~#最佳丛生芽诱导率分别为93.33%、63.33%,增殖系数5.22、2.99,苗高3.12cm、3.40cm。 (3)选用了稀土硝酸镧和烯效唑进行壮苗培养,以06剑河3~#和06庐山1~#继代试管苗作为试材,测定了相关生长、生理指标比较壮苗效果。试验结果表明稀土镧5mg/L使苗鲜重增加,促进丛生芽分化,提高叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白含量,促进高生长,适合作为增殖培养基中壮苗添加物;烯效唑0.5mg/L则能抑制苗高,提高叶绿素含量,提高植株抗性,适合用作增殖后的壮苗培养。 (4)继代5次以上的试管苗,首先在1/2WPM+IBA0.05～0.1mg/L+蔗糖20g/L生根诱导培养基暗培养15d,再转入1/2WPM+蔗糖20g/L正常光照培养,06庐山1~#不定根发生率23.33%。 (5)子叶添加IBA1.5mg/L后,不定根发生率100%。比较研究了子叶不定根发生中四种内源激素的含量变化,结果表明内源IAA对不定根的发生起关键性作用,根原基的启动需要高的内源IAA,而不定根的形成与根的伸长需要较低的内源IAA水平。IAA/ABA,IAA/GA_3比值较好反映出生根过程中几种激素的变化趋势,GA_3可能不是影响不定根发生的关键因素。
【关键词】：青钱柳 丛生芽增殖 壮苗培养 不定根发生 内源激素
【学位授予单位】：南京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：Q943.1;S792
【目录】：
  • 致谢3-4
  • 摘要4-5
  • Abstract5-11
  • 第一章 文献综述11-21
  • 1.青钱柳属资源概述11-13
  • 2.胡桃科组培研究进展13-16
  • 3.生根机理研究16-19
  • 4.课题来源、研究的目的及意义19-20
  • 5.本课题研究的主要内容20-21
  • 第二章 不同种源离体胚培养21-28
  • 1.材料与方法21-22
  • 1.1 材料21
  • 1.2 外植体处理与消毒21-22
  • 1.3 培养基与培养条件22
  • 1.4 观察、统计与数据分析22
  • 2.结果与分析22-25
  • 2.1 S_0、S_1、S_2对06庐山1~#污染率、萌发率和成苗率的影响22-23
  • 2.2 S_1对不同种源污染率、萌发率和成苗率的影响23-25
  • 3.讨论与小结25-28
  • 3.1 讨论25-26
  • 3.1.1 不同种源离体胚的培养与筛选25
  • 3.1.2 培养基中影响离体胚萌发与成苗的因素25-26
  • 3.2 小结26-28
  • 第三章 丛生芽的诱导与增殖培养28-43
  • 1.材料与方法28-30
  • 1.1 材料28
  • 1.2 研究方法28-30
  • 1.2.1 基本培养基的筛选28-29
  • 1.2.2 继代时间的筛选29
  • 1.2.3 初代培养基的筛选29
  • 1.2.4 继代培养基的筛选29-30
  • 1.3 观察、统计与数据分析30
  • 2.结果与分析30-39
  • 2.1 基本培养基的筛选30-32
  • 2.2 继代时间的筛选32-33
  • 2.3 初代培养基的筛选33-36
  • 2.3.1 06剑河3~#初代培养正交试验结果分析33-34
  • 2.3.2 06庐山1~#初代培养正交试验结果分析34
  • 2.3.3 06云南4~#初代培养正交试验结果分析34-35
  • 2.3.4 三个种源初代培养总体情况分析35-36
  • 2.4 继代培养基的筛选36-39
  • 2.4.1 06剑河3~#继代培养两因素试验结果分析36-37
  • 2.4.2 06庐山1~#初代培养两因素试验结果分析37-38
  • 2.4.3 06云南4~#继代培养两因素试验结果分析38-39
  • 2.4.4 三个种源继代培养总体情况分析39
  • 3.讨论与小结39-43
  • 3.1 讨论39-41
  • 3.1.1 基本培养条件的筛选39-40
  • 3.1.2 丛生芽诱导增殖的问题40-41
  • 3.2 小结41-43
  • 第四章 壮苗培养及相关生理生化基础43-59
  • 1.材料与方法43-47
  • 1.1 材料43
  • 1.2 添加生长调节剂进行壮苗培养43
  • 1.3 生长指标测定43-44
  • 1.4 生理生化指标测定44-46
  • 1.5 观察、统计与数据分析46-47
  • 2.结果与分析47-53
  • 2.1 添加生长调节剂对青钱柳试管苗生长特性的影响47-48
  • 2.1.1 稀土(硝酸镧)对青钱柳两个单株试管苗生长特性的影响47-48
  • 2.1.2 烯效唑对青钱柳两个种源试管苗生长特征的影响48
  • 2.2 生长调节剂对青钱柳试管苗生理生化特性的影响48-53
  • 2.2.1 叶绿素含量的变化49-50
  • 2.2.2 可溶性糖含量的变化50
  • 2.2.3 蛋白质含量的变化50-51
  • 2.2.4 超氧化物歧化酶(SOD)动态变化51-52
  • 2.2.5 过氧化物酶(POD)动态变化52-53
  • 3.指标间相关性分析53
  • 4.讨论与小结53-59
  • 4.1 讨论53-56
  • 4.1.1 稀土镧对青钱柳试管苗生长指标的影响53
  • 4.1.2 烯效唑对青钱柳试管苗生长指标的影响53-54
  • 4.1.3 稀土镧对青钱柳试管苗生理生化指标的影响54-55
  • 4.1.4 烯效唑对青钱柳试管苗生理生化指标的影响55-56
  • 4.2 小结56-59
  • 第五章 生根诱导59-65
  • 1.材料与方法59-60
  • 1.1 材料59
  • 1.2 方法59-60
  • 1.2.1 激素和其他生根诱导物的筛选59
  • 1.2.2 生根方法59-60
  • 1.2.3 其他生根诱导条件的探索60
  • 2.结果与分析60-63
  • 2.1 多种添加物质生根效果比较60-62
  • 2.2 两种方法生根效果比较62
  • 2.3 其他条件对生根效果的影响62-63
  • 3.讨论与小结63-65
  • 3.1 讨论63-64
  • 3.1.1 培养基、诱导方法对试管嫩茎生根的影响63
  • 3.1.2 试管嫩茎的发育状态与生根的关系63-64
  • 3.2 小结64-65
  • 第六章 不定根发生机理的初步研究65-77
  • 1.材料与方法65-67
  • 1.1 材料65-66
  • 1.2 研究方法66
  • 1.2.1 子叶不定根诱导66
  • 1.2.2 内源激素含量测定66
  • 1.3 观察统计与数据分析66-67
  • 2.结果与分析67-73
  • 2.1 不同培养基对子叶诱导不定根效果的影响67-69
  • 2.2 子叶诱导不定根过程中内源激素的变化69-73
  • 2.2.1 子叶不定根发生及其内源IAA含量变化69
  • 2.2.2 子叶不定根发生及其内源ABA含量变化69-70
  • 2.2.3 子叶不定根发生及其内源IAA/ABA比值变化70-71
  • 2.2.4 子叶不定根发生及其内源GA_3含量变化71-72
  • 2.2.5 子叶不定根发生及其内源IAA/GA_3比值变化72
  • 2.2.6 子叶不定根发生及其内源ZR含量变化72-73
  • 2.2.7 子叶不定根发生及其内源IAA/ZR比值变化73
  • 3.讨论与小结73-77
  • 3.1 讨论73-76
  • 3.1.1 青钱柳子叶不定根的发生73-74
  • 3.1.2 内、外源激素对子叶不定根发生作用的研究74-76
  • 3.2 小结76-77
  • 第七章 结论、创新点与展望77-81
  • 1.结论77-78
  • 2.本试验的创新之处78-79
  • 3.存在的问题与不足之处79
  • 4.今后研究的方向79-81
  • 参考文献81-86
  • 详细摘要86-89

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