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《南京林业大学》 2010年
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杉木遗传转化体系的研究

姚甲宝  
【摘要】: 杉木是我国特有常绿针叶树种之一,由于其生长快、材质优良,长期以来受到广泛栽培,目前位居南方针叶树人工林的首位,林木的蓄积量居人工林前列。但由于木质素化学结构的限制,在木本的生物质能源的转化中受到限制。本文试图利用阔叶树木质素合成关键酶CAld5H基因转化杉木,研究内容和结果如下: 以杉木茎段为外植体,系统研究影响愈伤组织诱导、继代和不定芽分化的各种因素,建立了高效稳定的组培体系。结果表明:愈伤组织诱导最适培养基为P6 + BA 1.5mg/L + 2,4-D 0.2mg/L + NAA 0.1 mg/L,诱导率达100%;DCR + 2,4-D 0.5mg/L + BA 0.5mg/L + KT 0.5mg/L + TDZ 0.008 mg/L为愈伤组织继代增殖最佳培养基,15d的增殖倍数为5.4;适宜不定芽分化的培养基为DCR + BA 1.5 mg/L + NAA0.1 mg/L + KT1.5 mg/L,不定芽的分化率达18.0±2.5%,平均不定芽数为5.5±0.43。所有培养基均加蔗糖30g/L,琼脂6g/L。本实验还对愈伤组织褐化进行了研究,培养基中添加褐化抑制剂或改变培养条件,并未能显著的降低褐化率。 杉木遗传转化体系的研究,以卡那霉素为筛选剂,确定愈伤组织诱导、不定芽分化的最佳筛选浓度分别为10~20mg/L、5~8mg/L。通过GFP瞬时表达,探索基因枪轰击的最佳参数,结果表明轰击距离为9cm,金粉用量300μg/枪,真空度28英寸汞柱,DNA用量1.5μg/枪,轰击2次(6cm﹠9cm)时GFP瞬时表达效果最佳,以上参数为基因枪转化杉木最优参数。利用基因枪介导阔叶树木质素合成关键酶CAld5H基因实验,未得到抗性愈伤,说明外源基因未整合到植物基因组中,需进一步研究和探讨。
【学位授予单位】:南京林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S791.27

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