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《江苏大学》 2019年
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β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对人绒毛膜细胞JEG-3表达黏附分子及趋化因子的影响

王韧  
【摘要】:研究目的:抗磷脂抗体(antiphospholipid antibodies,a PLs)的持续存在是抗磷脂综合征(Antiphospholipid syndrome,APS)的主要特征之一,与APS的致病密切相关。APS主要临床表现包括动静脉血栓形成和流产,后者又可称为自身免疫型复发性流产。抗磷脂抗体是自身抗体的异质群体,其中抗β2GPI抗体(antiβ2-glycoprotein I antibodies)是产科APS中最具病理性的自身抗体,在自身免疫型复发性流产中扮演重要角色。抗β2GPI抗体通过结合滋养层细胞表达的β2糖蛋白I(β2-glycoprotein I,β2GPI)将胎盘作为靶抗原。胎盘滋养层细胞被抗β2GPI抗体激活后,功能发生改变,细胞因子水平也发生改变。我们的前期研究发现,在β2GPI/抗β2GPI抗体(anti-β2GPI antibody)促使内皮细胞活化以及炎症发生中Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)发挥重要作用。本课题组既往的研究并未涉及β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对胎盘滋养层细胞的影响。通过预实验和查阅相关文献,本实验重点探讨β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对人绒毛膜细胞株JEG-3表达黏附分子和趋化因子的影响,以及TLR4/My D88信号通路是否在其中发挥作用。研究方法:(1)采用Western blot、ELISA以及RT-q PCR三种试验方法,分别检测经抗β2GPI抗体、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、非特异型对照抗体兔Ig G(RIg G)、无血清培养基(media)、β2GPI、牛血清白蛋白(BSA)处理人绒毛膜细胞株JEG-3后,VCAM-1、ICAM-1、IL-8的蛋白和m RNA水平表达。(2)采用Western blot和RT-q PCR两种试验方法分别检测经抗β2GPI抗体、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、非特异型对照抗体兔Ig G(RIg G)、无血清培养基(media)、β2GPI、牛血清白蛋白(BSA)处理人绒毛膜细胞株JEG-3后,TLR4和My D88的蛋白和m RNA水平表达。(3)采用Western blot、ELISA以及RT-q PCR三种试验方法分别检测经TAK-242预处理和未经处理的人绒毛膜细胞株JEG-3,观察TLR4和VCAM-1、IL-8表达是否相关。研究结果:(1)经β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理后,JEG-3细胞VCAM-1、ICAM-1、IL-8的基因和蛋白水平表达显著增加,和无血清培养基组相比差异有统计学意义(p0.05)。(2)经β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理后,JEG-3细胞TLR4和My D88的基因和蛋白水平表达显著增加,和无血清培养基组相比差异有统计学意义(p0.05)。经TAK-242预处理JEG-3后,β2GPI/抗β2GPI复合物组VCAM-1、IL-8的表达被有效抑制(p0.05)。结论:(1)单独的抗β2GPI抗体及β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够有效促进人绒毛膜细胞株JEG-3表达黏附分子和趋化因子VCAM-1、ICAM-1、IL-8,有助于细胞黏附及炎症反应。(2)单独的抗β2GPI抗体及β2GPI/抗β2GPI抗体复合物都能够诱导JEG-3细胞高表达TLR4和My D88;TLR4通路抑制剂TAK-242能够降低复合物刺激组VCAM-1、IL-8的表达,表明TLR4信号通路在其中发挥重要作用。
【学位授予单位】:江苏大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R392

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