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《江苏大学》 2007年
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匙羮藤多糖的分离纯化及其生物活性研究

范群艳  
【摘要】: 匙羹藤[Gymnema sylvestre(Retz.)Schult.]为萝藦科匙羹藤属类植物,其主要活性成分为三萜皂甙类物质,又称匙羹藤酸(Gymnemic acid,简称GA)。研究表明,匙羹藤叶提取物具有降血糖、降血脂、抗龋齿、抑制甜味和抑制肥胖等作用,可用来防治糖尿病和肥胖症,目前对匙羹藤的研究主要集中在三萜皂甙类成分及其提取物的药理活性,对多糖等成分的研究未见报道。多糖是一重要的活性成分,已成为天然药物研究的一个热点,许多植物多糖具有抗肿瘤、降血糖、抗氧化和抗病毒等多种药理活性,具有重要的研究和开发价值。本论文以我国广西产匙羹藤叶为原料,研究匙羹藤多糖的提取和纯化工艺、匙羹藤多糖的免疫活性、抗肿瘤以及抗氧化活性,为匙羹藤多糖保健食品及药品的开发提供基础。 主要研究内容和结果如下: 1.研究了水提法提取匙羹藤多糖的工艺条件。以匙羹藤多糖的得率为考察指标,在单因素试验的基础上,采用四因素三水平正交实验法优选了提取工艺,最佳提取工艺条件为:温度100℃、固液比1∶15、时间3h和提取次数2次,在该工艺条件下匙羹藤多糖得率为2.21%,粗多糖中多糖含量为25.57%。影响匙羹藤多糖得率因素的主次顺序为温度、时间、提取次数和固液比。 2.研究了匙羹藤多糖的免疫活性。结果表明:匙羹藤粗多糖(GSP-1)在剂量300mg/kg下,能增强免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能(p<0.05);在100mg/kg、300mg/kg下,能提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平(p<0.05或p<0.001);在剂量300mg/kg下,能增加免疫抑制小鼠胸腺指数和脾指数(P<0.05或p<0.01)。匙羹藤脱蛋白多糖(GSP-2)在剂量100mg/kg、300mg/kg下,能增强免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能(p<0.05);在100mg/kg、300mg/kg下,能提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平(p<0.05或p<0.001);在100mg/kg、300mg/kg下,能增加免疫抑制小鼠胸腺指数和脾指数(P<0.05或p<0.01)。 3.研究了匙羹藤多糖的纯化工艺。匙羹藤多糖经脱蛋白、脱色、透析及DEAE-52柱层析纯化后,得到了五种多糖组分:GSP11、GSP22、GSP33、GSP44和GSP55,纯度分别为80.7%、87.3%、84.2%、90.8%和94.9%,HPLC法测得五种多糖组分的分子量分别为52951、544820、954496、1049851和1896802。采用气相色谱法测定了五种多糖组分的单糖组成。结果表明:GSP11是由木糖和葡萄糖组成,其摩尔比为木糖:葡萄糖=1:2.47;GSP22和GSP33是由鼠李糖,葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比分别为鼠李糖:葡萄糖:半乳糖=1.6:1:1.22,1:1.5:1.1;GSP44是由木糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为木糖:葡萄糖:半乳糖=1:1.03:1.2;GSP55是由鼠李糖、木塘、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为鼠李糖:木糖:葡萄糖:半乳糖=1:1.21:1.81:2.58。 4.采用MTT法,研究了匙羹藤多糖的体外抗肿瘤活性。结果表明:GSP-1、GSP-2、GSP11、GSP22、GSP33、GSP44和GSP55对人胃癌细胞(AGS、SGC)、人血癌细胞(U937)都有不同程度的抑制作用,其中多糖组分GSP11对U937的抑制作用最好,浓度为160μg/mL时,抑制率达69.46%;多糖组分GSP22对SGC的抑制作用最好,浓度为160μg╱mL时,抑制率达69%。 5.采用水杨酸法,研究了匙羹藤多糖的体外抗氧化活性。结果表明:多糖组分GSP11、GSP22、GSP33、GSP44和GSP55的清除羟基自由基效果高于GSP-1,其中多糖组分GSP11清除效果最好,浓度为200μg/mL时,清除率达到89.99%。
【关键词】:匙羹藤 多糖 纯化 免疫活胜 体外抑瘤活性 体外抗氧化活性 MTT法
【学位授予单位】:江苏大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R284.2
【目录】:
  • 摘要5-7
  • Abstract7-14
  • 第一章 绪论14-26
  • 1.1 本课题研究的目的和意义14
  • 1.2 匙羹藤的研究进展14-20
  • 1.2.1 匙羹藤的化学成分15
  • 1.2.2 匙羹藤的药理作用15-20
  • 1.2.3 匙羹藤的开发利用20
  • 1.3 多糖的研究进展20-25
  • 1.3.1 多糖的提取、分离纯化及鉴定21-24
  • 1.3.2 多糖的生物活性24-25
  • 1.4 本课题研究的主要内容25-26
  • 第二章 匙羹藤多糖的提取工艺研究26-33
  • 2.1 材料与仪器26-27
  • 2.1.1 材料与试剂26
  • 2.1.2 仪器26-27
  • 2.2 实验方法27-28
  • 2.2.1 匙羹藤粗多糖的提取27
  • 2.2.2 多糖含量的测定方法27
  • 2.2.3 单因素试验27
  • 2.2.4 正交实验设计27-28
  • 2.3 结果与讨论28-32
  • 2.3.1 多糖含量的测定28
  • 2.3.2 单因素试验28-30
  • 2.3.3 正交试验30-32
  • 2.4 本章小结32-33
  • 第三章 匙羹藤多糖的免疫活性研究33-38
  • 3.1 材料与仪器33-34
  • 3.1.1 材料与试剂33
  • 3.1.2 仪器33-34
  • 3.2 实验方法34-35
  • 3.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验34
  • 3.2.2 小鼠溶血素抗体生成实验及对免疫器官的影响34-35
  • 3.3 结果与讨论35-37
  • 3.3.1 匙羹藤粗多糖对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响35-36
  • 3.3.2 匙羹藤粗多糖对小鼠溶血素水平的影响36-37
  • 3.3.3 匙羹藤粗多糖对小鼠免疫器官脏器系数的影响37
  • 3.4 本章小结37-38
  • 第四章 匙羹藤多糖的分离纯化及初步鉴定38-56
  • 4.1 材料与仪器38-39
  • 4.1.1 材料与试剂38
  • 4.1.2 仪器38-39
  • 4.2 实验方法39-44
  • 4.2.1 脱蛋白试验39-40
  • 4.2.2 脱色试验40-41
  • 4.2.3 纯化试验41-42
  • 4.2.4 分子量测定42-43
  • 4.2.5 单糖组成分析43-44
  • 4.3 结果与讨论44-54
  • 4.3.1 脱蛋白试验44-45
  • 4.3.2 脱色试验45-46
  • 4.3.3 纯化试验46-47
  • 4.3.4 分子量测定47-50
  • 4.3.5 单糖组成分析50-54
  • 4.4 本章小结54-56
  • 第五章 匙羹藤多糖的体外抗肿瘤和抗氧化活性研究56-66
  • 5.1 材料与仪器56-57
  • 5.1.1 材料与试剂56
  • 5.1.2 仪器56-57
  • 5.2 实验方法57-58
  • 5.2.1 体外抗肿瘤试验57-58
  • 5.2.2 体外抗氧化试验58
  • 5.3 结果与讨论58-65
  • 5.3.1 体外抗肿瘤试验58-63
  • 5.3.2 体外抗氧化试验63-65
  • 5.4 本章小结65-66
  • 第六章 结论与展望66-68
  • 6.1 主要结论66-67
  • 6.2 展望67-68
  • 参考文献68-72
  • 致谢72-73
  • 攻读硕士学位期间发表的论文目录73

【引证文献】
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