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《江苏大学》 2009年
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强力霉素促进小鼠胸腺上皮细胞增殖及其信号转导机制的研究

陈勋  
【摘要】: 目的强力霉素(Doxycycline,Dox)是一种四环素类抗生素,近年来发现有多种其它非抗生素的生物学功能,本项研究是要探讨Dox对小鼠胸腺上皮细胞系(MTEC1)作用的分子机制,为进一步探索Dox对免疫重建的影响奠定基础。 方法运用[~3H]-TdR掺入法分析Dox对MTEC1细胞增殖情况的影响,同时对Dox处理的MTEC1细胞每天(共8天)进行计数并绘制细胞生长曲线。采用流式细胞术分析Dox处理后MTEC1细胞周期各个时相的改变。然后应用Real-time PCR分析Dox处理后MTEC1细胞的细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、CDK4、H-Ras、E2F3和c-myc等mRNA的表达;接着使用蛋白印迹技术(Western blotting)对Dox处理后MTEC1细胞的cyclin D1、cyclin E、Ras、总的ERK1/2(T-ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和c-myc等蛋白的表达水平进行分析。最后,为进一步评价Ras-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对Dox促进细胞增殖所发挥的作用,先用ERK抑制剂U0126预先处理MTEC1,继而加入Dox处理MTEC1,随后采用[~3H]-TdR掺入法、Real-time PCR、Western blotting等技术和方法分析Dox对MTEC1的作用。 结果本研究发现Dox本身具有促进MTEC1细胞生长的作用。在0.1-100μg/ml这个剂量范围内,Dox相比于对照组能够促进MTEC1细胞的增殖,其中10μg/ml Dox具有最大的促增殖效应。在10μg/ml药物浓度作用24、48、72小时后,MTEC1细胞分别增长2.27、5.04、3.58倍。细胞周期分析显示10μg/ml Dox处理后,G0/G1期MTEC1细胞自45%降到37%,而S期相应地自39%上升到48%。研究还发现Dox处理后,MTEC1细胞中cyclin E、CDK2、CDK4、Ras、E2F3、c-myc等mRNA的表达水平明显提高,而cyclinD1的mRNA水平却没有明显改变。Western blotting分析也显示了类似的结果,cyclin E、Ras、c-myc等蛋白水平显著上升,cyclin D1蛋白水平虽然也发生上调,但这种差别并无统计学意义。此外,Dox还导致MTEC1细胞p-ERK1/2的累积,在1-2小时范围内达到最高水平。随着抑制剂U0126浓度的增加,Dox的促增殖作用被逐渐抑制。然而,即使在10μM的U0126浓度作用下,这种抑制效应也并没有被完全抑制达到基础水平。 结论Dox通过缩短细胞周期的G0/G1期促进MTEC1细胞的增殖,在其促增殖效应中,部分信号转导是由于Ras-ERK/MAPK通路的活化而传递的。总之,当前的研究揭示了在抗生素古老家族中强力霉素的一个新作用。由于胸腺是T细胞发育的重要器官,而胸腺上皮细胞对胸腺细胞的发育具有重要的调控作用,因此Dox可能具有促进T细胞重建的功能,但尚需进一步探索。
【学位授予单位】:江苏大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R96

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