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《江苏大学》 2009年
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发酵芝麻饼粕的抗氧化功能及特征成分研究

邵元龙  
【摘要】: 我国是芝麻生产大国,资源丰富,仅芝麻饼粕的年产量就在50万吨以上。芝麻饼粕中含有40~60%的蛋白质,0.5~1.0%的木脂素,但目前主要作为饲料或肥料使用,深加工和综合利用的研究尤显不足。 本课题旨在通过发酵芝麻饼粕提高其抗氧化活性,充分利用芝麻饼粕资源。用酱油曲霉发酵芝麻饼粕,对发酵基质组成和乙醇提取条件进行了优化,研究了木脂素提取物抗氧化活性和降低高血脂的作用;对发酵芝麻饼粕提取物中产生的特征物质进行分离纯化和鉴定,确定其为芝麻素酚,并对芝麻素酚的抗氧化活性进行了研究。主要研究结果如下: (1)优化了酱油曲霉发酵芝麻饼粕提高抗氧化活性发酵基质组成和木脂素提取条件。发酵基质组成的优化结果为:芝麻饼粕中添加辅料葡萄糖、硫酸铵和麦麸量分别为:1.9%、1.6%和2.6%;于28℃条件下固体发酵120 h;木脂素提取条件的优化结果为:乙醇浓度60%、液料比16 mL/g、时间120 min、温度50℃、转速150 r/min。优化的芝麻饼粕发酵提取物清除DPPH自由基活性为87.9%,未发酵提取物为53.4%,发酵的提取物中总酚含量为2.23%,未发酵的1.85%。 (2)对芝麻饼粕发酵提取物(SCFE)体外抗氧化活性进行了研究,其活性优于芝麻饼粕提取物(SCE)。主要结果为:浓度为0.1~1.0 mg/mL时,SCFE的总抗氧化能力(TAC)和还原能力均随浓度的增大而逐渐增强,浓度高于0.5mg/mL时,增强效果显著;浓度为0.5 mg/mL和1.0 mg/mL时,SCFE对DPPH自由基清除率分别为72.7%和87.5%,而SCE为53.7%和70.6%;浓度为1.0 mg/mL时,SCFE对O_2~-·的清除率比SCE清除值高20%;浓度为1.0 mg/mL时,SCFE对自发和H_2O_2诱导的鼠肝脏微粒体脂质过氧化抑制率分别为84.4%和67%,SCE的抑制率分别为76.2%和52.3%;在0.1~1.0 mg/mL时,SCFE对亚油酸脂质氧化的抑制率逐渐增强,优于SCE;0.1%的芝麻木脂素提取物SCFE抑制冷藏熟肉糜脂质过氧化效果与0.02%的Vc作用相当。 (3)通过动物试验,对SCFE预防和调节小鼠高血脂的作用进行了研究。结果发现SCFE既能有效降低小鼠的血脂水平,改善血脂代谢,减少动脉粥样硬化的发生几率,又能有效提高小鼠体内的抗氧化水平,增强抗氧化酶活性,减少过氧化脂质含量,且SCFE的作用效果优于SCE。主要结果为:诱导模型小鼠体内的抗氧化能力和抗氧化酶活性性显著下降,氧化的代谢产物量显著提高;灌胃SCFE和SCE后,显著降低总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及动脉硬化指数(AI_1,AI_2),显著提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;此外还显著提高小鼠血清的总抗氧化能力(TAC)和超氧化物歧化酶的活性(SOD),降低脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,在剂量范围内,呈现显著的量效关系,给药SCFE的小鼠血清中各指标均显著优于SCE;比较了预防组和调节组中相同指标的相关系数,发现SCFE和SCE对高脂高胆固醇小鼠的预防效果要优于调节的效果。高血脂小鼠血脂水平和动脉硬化指数与其氧化-抗氧化水平密切相关,二者相互促进。 (4)对SCFE中的特征物质P_X进行分离纯化和鉴定。SCFE经过乙酸乙酯萃取,硅胶柱层析得到纯化的P_X,得率分别为27.19%和1.43%;硅胶柱色谱分离纯化P_X用石油醚/乙酸乙酯=3/1和1/1两种比例洗脱剂洗脱;硫酸显色后,薄层层析(TLC)中P_X的迁移率R_f为0.20,紫外扫描为单一峰;P_X两个特征吸收波长分别为228 nm和287 nm;HPLC中其保留时间为13.5 min;LC-MS定性检测,分子量为370.0。该特征物质被鉴定为芝麻素酚,分子组成为:C_(20)H_(18)O_7。 (5)对芝麻素酚体外抗氧化活性进行了研究。芝麻素酚具有抑制大鼠肝脏微粒体自发及H_2O_2诱导的脂质过氧化作用。在抑制自发性肝脏微粒体脂质过氧化作用时,芝麻素酚浓度从10μg/mL上升至100μg/mL时,SOD酶活性从130.7u/mgprot提高到198.3 u/mgprot,MDA抑制率从21.7%提高到61.8%;在亚油酸-吐温乳化系统和亚油酸-乙醇系统中,芝麻素酚均具有抑制亚油酸脂质氧化的作用,在乳化系统中,芝麻素酚的抑制效果优于BHT;浓度为20μg/mL时,芝麻素酚清除DPPH自由基的效果与5μg/mL BHT和Vc相当。 通过生物转化芝麻饼粕中木脂素的研究,为芝麻饼粕深度加工和利用奠定了基础。利用微生物发酵技术,对芝麻饼粕中木脂素进行了生物转化,并分离纯化得到具有强抗氧化活性的特征物质芝麻素酚,为进一步开发利用芝麻饼粕提供理论依据。
【学位授予单位】:江苏大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R151

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【引证文献】
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