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《江苏大学》 2010年
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TGF-β1诱导肺泡上皮细胞间质转化对肺纤维化的意义研究

黄振杰  
【摘要】： 目的：以TGF-β1诱导A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT),探讨EMT过程的信号转导途径对肺纤维化发病机制的意义。 方法：体外培养A549细胞,以TGF-β15ng/ml进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志物的mRNA在0h、1h、3h、6h、12h和24 h的表达水平,Westernblot检测上皮及间质细胞的标志物在0h、3h、6h、12h、24h、48h和72h的表达水平,以及信号转导蛋白P-Smad 2／3、Snail1、Snail2在0h、24h、48h的表达水平,应用倒置相差显微镜观察TGF-β1干预前后细胞形态学的变化,并在0h、24h、48h照相记录。 结果：TGF-β15ng/ml干预后,A549细胞上皮细胞标志物的mRNA和蛋白表达随着时间延长总体下调(P0.05),间质细胞标志物的mRNA和蛋白表达上调(P0.05)；信号转导蛋白P-Smad 2/3、Snaill上调(P0.05),snail2弱表达(P0.05)；倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。 结论：TGF-β1可以在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制与Smad 2/3、Snail1信号转导途径相关,提示肺泡上皮细胞向间质细胞的转化是肺纤维化发生的直接原因,而Smad 2/3、Snaill信号转导途径很可能是关键环节。通过诱导或促进肺泡上皮细胞向间质细胞转化,可以促使肺纤维化的发病,而通过阻断这一过程及其下游的信号转导通路有望治疗肺纤维化。
【关键词】：转化生长因子β1 A549细胞 上皮细胞间质转化 肺纤维化
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R563
【目录】：
  • 摘要6-8
  • ABSTRACT8-12
  • 第一章 绪论12-19
  • 1.1 间质性肺病发病机制的传统学说12-15
  • 1.2 新模式引入的背景15-16
  • 1.3 EMT的定义16-17
  • 1.4 本研究的目的、方法、意义、实验技术路线图17-19
  • 第二章 肺泡上皮细胞培养、干预、形态学观察19-23
  • 2.1 材料19
  • 2.2 方法19-21
  • 2.3 结果21
  • 2.4 讨论21-23
  • 第三章 EMT诱导过程中细胞标志物的mRNA表达23-34
  • 3.1 材料23
  • 3.2 方法23-28
  • 3.3 结果28-32
  • 3.4 讨论32-34
  • 第四章 EMT诱导过程中细胞标志物及信号蛋白的表达34-45
  • 4.1 材料34-35
  • 4.2 方法35-39
  • 4.3 结果39-41
  • 4.4 讨论41-45
  • 第五章 主要结论和展望45-46
  • 5.1 主要结论45
  • 5.2 展望45-46
  • 参考文献46-51
  • 文献综述51-61
  • 英文缩写索引61-62
  • 致谢62-64
  • 攻读硕士学位期间发表的文章64

【参考文献】
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