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《南京农业大学》 2011年
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牛蒡子苷提取、纯化及其对小鼠C2C12细胞生长的影响

刘泽  
【摘要】:牛蒡子为菊科(Compositae)牛蒡属(Arctium)植物牛蒡(Arctium lappa Linne)干燥成熟果实,在我国有着广泛的分布和悠久的药用历史,其中的牛蒡子苷是一种具有多种生理活性的物质。本课题以牛蒡子作为研究对象,对其有效成分牛蒡子苷进行提取和纯化,并对其生理活性进行了初步研究,为牛蒡子中木脂素成分牛蒡子苷的进一步开发利用奠定了基础。 首先,确定了牛蒡子中牛蒡子苷的提取方案。以牛蒡子苷标准品为对照,利用高效液相色谱法定量测定牛蒡子苷,以牛蒡子苷的得率为指标,采用正交试验对提取的工艺参数进行优化,最后确定牛蒡子苷的提取方案是:乙醇浓度70%(V/V),料液比1:8(W/V),提取时间1h,回流次数3次。 其次,利用大孔吸附树脂、硅胶柱层析法对牛蒡子中牛蒡子苷的乙醇提取物进行纯化,以牛蒡子苷标准品为对照,利用高效液相色谱法定量测定牛蒡子苷,最终得到牛蒡子苷纯化物(≥80%)。同时,确定了牛蒡子苷粗品纯化工艺。对6种大孔吸附树脂进行筛选,确定最佳树脂为D4006型大孔树脂;并对最佳树脂吸附-洗脱牛蒡子苷粗提液的工艺进行了实验研究,确定了分离富集工艺为:上样流速控制为1BV/h,柱径高比控制为1:5;经水洗除去糖和蛋白质后,再换以4BV 50%乙醇洗脱,收集50%醇洗液。经硅胶柱层析纯化后,浓缩干燥即得纯度大于80%的牛蒡子苷。 最后,对牛蒡子苷的促生长作用进行了初步研究。以体外培养的C2C12成肌细胞和经2%马血清诱导分化的肌细胞为研究对象,采用四唑盐(MTT)比色法检测C2C12成肌细胞增殖能力,以诱导分化后的肌细胞内蛋白含量和磷酸肌酸激酶含量变化为指标观察大豆黄酮和牛蒡子苷对分化后的肌细胞生长的影响,采用real-time PCR分析C2C12细胞中ERβmRNA表达量。结果表明牛蒡子苷终浓度达到10ng/ml、大豆黄酮终浓度为10ng/ml时均能极显著促进C2C12成肌细胞增殖(P0.01),促进肌细胞总蛋白质的合成(P0.01),促进肌细胞肌酸激酶的活性(P0.01),促进肌细胞中ERβmRNA表达量极显著上升。所以,植物提取物牛蒡子苷可提高C2C12成肌细胞的增殖和分化后的肌细胞肥大,进而促进骨骼肌细胞肥大型生长。这种促生长作用是通过直接作用于肌细胞上的ERβ介导的。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S853.7

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【参考文献】
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