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《南京农业大学》 2011年
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一个油菜菌核病抗病相关基因的功能初步分析

王卫青  
【摘要】:油菜(Brassica napus)是世界上主要的油料作物和重要的经济作物,在经济和农业生产中具有重要作用。核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的油菜菌核病是油菜生产上的重要病害,但至今未发现免疫或者是高抗品种。小繁缕(Stellaria apetala Ucria)是一种常见的田间杂草,对核盘菌表现免疫性。研究核盘菌与小繁缕非寄主互作、与油菜寄主互作的分子机制,寻找抗病或者致病相关基因,对菌核病的防治有着重要的意义。Sspg1d是多聚半乳糖醛酸酶的一种,在核盘菌侵染寄主早期发挥作用的一个重要致病因子。本课题组将sspg1d作为诱饵,利用酵母双杂交方法筛选小繁缕cDNA文库,筛选到1个膜蛋白(命名为ppn20)。经实验证明,ppn20是一个G蛋白偶联受体,小繁缕在受到核盘菌诱导后表达量明显增加。本研究主要致力于研究ppn20的功能,利用农杆菌介导法对油菜与烟草进行转化,获得转基因植株,通过分子检测及表型分析推断ppn20基因的功能。我们将携带有ppn20基因的植物表达载体ppn20-pBinplus转化农杆菌后用农杆菌介导法对甘蓝型油菜进行遗传转化,经过kan+抗性筛选,成功获得10株阳性植株,其中7株成活;对阳性植株进行PCR和RT-PCR检测,发现目的基因成功导入油菜植株,大部分能顺利表达;对幼苗进行接种表型鉴定,结合分子鉴定结果,发现表达ppn20基因的植株均未能明显抵抗核盘菌的侵染或扩展,与非转基因的对照植株对核盘菌抵抗能力无明显差别。转基因烟草对核盘菌的抵抗能力与对照相似。将基因ppn20构建到植物表达载体PVX上,转化农杆菌后注射烟草,使基因ppn20在烟草中瞬时表达,然后对注射区域接种核盘菌,观察发现注射含ppn20基因农杆菌区域与注射含对照载体农杆菌区域抗病性无明显差别。利用基于泛素的酵母双杂交体系初步验证膜蛋白ppn20与G蛋白可能并不存在相互作用,这可能是造成ppn20基因的表达在油菜与烟草中不能正常表现对核盘菌抗性的原因。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S435.654

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【参考文献】
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