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《南京农业大学》 2011年
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切花菊转DdICE1基因研究

陈琳  
【摘要】:菊花[Chrysanthemum grandiflorum (Ramat.) Kitamura]是我国十大传统名花、世界四大切花之一,在园林、家庭绿化美化中占有十分重要的地位。本研究将从异色菊中克隆得到的逆境诱导基因DdICE1的正义及反义植物表达载体导入根癌农杆菌EHA105中,以目前生产应用比较广泛的切花菊品种‘神马’无菌叶片为外植体,通过农杆菌介导法进行同源遗传转化研究。对转基因后代逆境胁迫耐性(低温、干旱、高盐)进行了鉴定,同时探讨了与胁迫耐性提高有关的基因表达量变化及生理生化指标。主要研究结果如下: 1.转录因子DdICE1基因转化切花菊‘神马’及转基因植株的获得 成功构建了由CaMV35S驱动DdICE1基因的正义及反义植物表达载体,将携带DdICE1基因的农杆菌侵染切花菊‘神马’成功实现了DdICE1对切花菊‘神马’的同源转化,通过对潮霉素筛选后初步得到抗性植株,对植株进行PCR、半定量RT-PCR及荧光定量RT-PCR检测,结果表明DdICE1的同源转化实现了基因整合表达。共获得了10株超量表达DdICE1的转基因株系(Ti)及3株表达量比未转化植株WT低的转基因株系(TAi)。 2.转基因植株后代的耐性分析 对转基因植株后代逆境胁迫耐性(低温、干旱、高盐)进行了初步鉴定,同时探讨了与胁迫耐性提高有关的基因表达量变化及生理生化基础。对T0代转基因植株和对照植株(WT)进行了低温耐性分析,结果表明,在低温胁迫下,与WT植株相比,过量表达的转基因株系半致死温度明显较低,而TRNAi2株系半致死温度较高。选择半致死温度差异较大的Ti2、TAi2及WT植株进行脚芽恢复生长试验,结果显示,未转化植株(WT)存活率分别为81.7%(-6℃),46.7%(-9℃),Ti2植株的存活率分别为93.3%(-6℃),70%(-9℃),而TAi2植株存活率分别为46.7%(-6℃),23.3%(-9℃),说明过量表达的转基因植株(Ti2)耐低温能力有了较大的提高。从表达量变化上看,转基因株系和未转化植株叶片中ICE1基因及下游CgDREBa基因表达量均呈先升高再缓慢下降的变化趋势,但Ti2植株CgDREBa基因表达量水平始终高于WT植株且在9h时达到最高峰;而与WT植株相比,TAi2植株CgDREBa基因表达量一直处于很低的水平。另外,由ICE1基因和CgDREBa基因表达量水平变化趋势相同可以推测,ICE1基因在低温驯化条件下激活了了下游CgDREBa基因的表达,从而进一步诱导下游与耐寒相关基因的表达,从而提高了植株耐寒性。从生理变化上看,脯氨酸含量在低温处理前(0 h)转基因株系及未转化植株WT均处于较低且一致的水平,在低温胁迫下,转基因株系及WT植株中脯氨酸含量水平随时间均呈缓慢升高的状态,而Ti2株系脯氨酸含量水平及幅度均明显高于未转化植株WT及TAi2植株。转基因株系及WT植株中丙二醛含量的变化趋势相似,丙二醛含量水平也随时间均呈缓慢升高的状态且Ti2株系明显低于WT及TAi2植株。转基因株系及WT植株中SOD和POD活性变化趋势相似,但Ti2株系中SOD和POD活性水平始终高于WT及TAi2植株。表明过量表达DdICE1的转基因植株在低温胁迫下的抗过氧化能力和抗渗透胁迫能力较WT及TAi2植株有所增强。 对转基因株系及WT植株进行干旱耐性分析时,结果显示,Ti2植株的存活率为88.3%,显著高于WT植株(43.3%)及TAi2植株(11.7%),表明Ti2转基因株系的耐旱能力得到提高。从基因表达量上看,转基因株系和WT植株叶片中ICE1基因及下游CgDREBa基因表达量均呈先升高再缓慢下降的变化趋势,且Ti2植株基因表达量水平始终明显高于WT及TAi植株,由ICE1基因和CgDREBa基因表达量水平变化趋势相同可以推测,ICE1基因在胁迫条件下激活了了下游CgDREBa基因的表达,从而提高植株干旱胁迫耐性。从生理变化上看,转基因植株Ti2的SOD、POD活性和脯氨酸含量都显著高于WT及TAi植株,MDA的含量则低于WT及TAi2植株,表明过量表达DdICE1的转基因植株受到干旱胁迫后抗氧化和抗渗透胁迫能力得到提高,从而增强了转基因切花菊的耐干旱胁迫能力。 对转基因株系及WT植株进行耐盐性分析时,结果显示,Ti2植株的存活率(96.7%)明显高于WT植株(61.7%)及TAi2植株(41.7%),表明Ti2转基因株系的耐盐性得到提高。从基因表达量上看,随着NaCl溶液浓度逐渐提高,Ti2、TAi2株系和WT植株叶片中ICE1基因及下游CgDREBa基因表达量均呈先升高再缓慢下降的变化趋势,但Ti2植株基因表达量水平始终高于WT植株且在10 d时达到最高峰;而与WT植株相比,TAi2植株基因表达量变化不明显。ICE1和CgDREBa表达量水平变化趋势相同可以推测,ICE1在盐胁迫条件下激活了CgDREBa的表达,从而进一步诱导下游与耐盐相关基因的表达,提高植株耐盐性。在盐胁迫下,转基因植株Ti2的SOD、POD活性和脯氨酸含量都显著高于WT及TAi2植株,MDA的含量则低于WT及TAi2植株,表明过表达转基因植株受到盐胁迫后抗氧化和抗渗透胁迫能力得到提高,从而增强了DdICE1表达的转基因切花菊的耐盐胁迫能力。 以上数据显示,转正义DdICE1基因切花菊植株的综合耐逆性均比WT及TAi2植株有所增强。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S682.11

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙磊;张启翔;;地被菊‘北林黄’再生体系的建立及其抗生素敏感性研究[J];安徽农业科学;2006年19期
2 李新玲;杨传平;徐香玲;曲敏;;与逆境胁迫相关的rd29A启动子和CBF2基因的克隆及其表达载体构建[J];安徽农业科学;2007年13期
3 龚学臣,季静,王罡,抗艳红,任永霞;应用农杆菌介导法进行菊花的遗传转化[J];北方园艺;2005年02期
4 王侠礼;转基因技术在观赏植物育种中的应用[J];北方园艺;2005年06期
5 吕晋慧;孙明;孙磊;吴月亮;;菊花基因工程研究进展[J];北方园艺;2007年01期
6 高亦珂,赵勃,丁国勋,张启翔;菊花茎叶外植体再生体系的研究[J];北京林业大学学报;2001年01期
7 吕晋慧,吴月亮,孙磊,高亦珂,张启翔;菊花叶片不定芽再生体系的研究[J];北京林业大学学报;2005年04期
8 李秋杰;陈春燕;张吉;;6-BA和NAA对菊花叶片离体再生的影响[J];长江大学学报(自科版)农学卷;2007年03期
9 何俊平;陈发棣;陈素梅;房伟民;缪恒彬;罗火林;;石蒜凝集素基因转化切花菊及抗蚜性鉴定[J];西北植物学报;2009年11期
10 侯夫云;张立明;王庆美;李爱贤;张海燕;董顺旭;;植物耐非生物胁迫的分子机制[J];分子植物育种;2007年S1期
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1 皮伟;根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究[D];西南农业大学;2004年
2 刘军;菊花再生体系的建立及农杆菌介导绿色荧光蛋白(GFP)基因转化的研究[D];山东农业大学;2004年
3 梁慧;菊花高频再生体系建立及根癌农杆菌介导遗传转化体系的优化[D];西南大学;2006年
4 牟宁宁;组织培养新技术在菊花组织培养中的应用研究[D];北京林业大学;2007年
5 周涌;菊花再生体系的建立及根癌农杆菌介导DAD1基因转化体系的优化[D];湖南农业大学;2007年
6 韩伟;菊花品种再生体系和遗传转化的初步探索[D];华中农业大学;2007年
7 许瑛;菊花抗寒特性研究及抗寒评价体系的建立[D];南京农业大学;2007年
8 崔新利;匍匐型地被菊转DmDREBα基因研究[D];南京农业大学;2009年
【共引文献】
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1 郑昭英,孙小镭,刘世琦,高俊凤;乙烯在黄瓜体内分布及周年变化动态研究初报[J];山东农业科学;2003年04期
2 梁太波,张淑香,史春余,王汝娟,杨馥成;活力素对菠菜产量及硝酸盐含量的影响[J];山东农业科学;2005年01期
3 曹世彪,陈双臣,李志娟;土壤调理剂对温室番茄产量品质的影响[J];山东农业科学;2005年03期
4 叶宝兴,毛达超,刘学春;超级小麦生育后期根系活力与净光合速率相关性的研究[J];山东农业科学;2005年04期
5 张晗;高永超;沙伟;李汝玉;戴双;;紫萼藓科植物DNA提取及遗传多样性的分析[J];山东农业科学;2006年01期
6 孙慧敏;于振文;颜红;史桂萍;;不同土壤肥力条件下施磷量对小麦产量、品质和磷肥利用率的影响[J];山东农业科学;2006年03期
7 萧蓓蕾;李德全;胡晓丽;;盐胁迫对转ZmPP2C2基因烟草和野生型烟草叶片膜脂过氧化及体内保护系统的影响[J];山东农业科学;2008年01期
8 于文艳;刘世琦;梁庆玲;郝树芹;;大蒜二倍体与四倍体生长和生理指标的比较研究[J];山东农业科学;2008年02期
9 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
10 李凯;杨建平;马宁;殷昭平;冯其伦;;低温处理对裸仁南瓜幼苗抗寒性指标的影响[J];山东农业科学;2009年01期
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1 郑艺梅;郑琳;华平;胡秋丽;黄霞;;糙米发芽过程中营养成分及抗营养因子变化的研究[A];安徽省第五届“兴皖之光”青年学术年会论文集(农科卷)[C];2005年
2 裴孝伯;解静;余纪柱;;不同南瓜砧木嫁接对黄瓜果实Vc、可溶性糖和蛋白质的影响[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
3 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
4 马欢;刘伟伟;王秀菊;刘士清;李建昌;张无敌;;不同阴离子在生物质发酵产氢中的作用研究[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
5 李孝良;李健姣;吕宝磊;陈效民;王晓洋;詹国飞;;肥料与石膏配施对滨海盐土玉米生理活性的影响[A];土肥水资源高效利用与农业面源污染防控技术研讨会论文集[C];2011年
6 陈丽平;赵方贵;李敏;杨延杰;陈宁;;几种蔬菜根浸提液对黄瓜幼苗的化感作用[A];山东园艺学会第七次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2011年
7 刘红梅;宋波;李治能;张锦恬;;打造宁夏六盘山特色花卉园艺产业的设想[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
8 李冉馨;李雯琪;李彦;张启翔;吕英民;;抗寒花果兼用梅花新品种选育研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
9 张路;张启翔;潘会堂;;灰岩皱叶报春引种与利用研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
10 李婷婷;张秀新;吕英民;;盆栽芍药有机生态型无土栽培基质配方筛选[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
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1 艾方;柑桔—糯米汁混合发酵酒的研制[D];华中农业大学;2010年
2 李福存;发酵鸭血肠生产工艺研究[D];华中农业大学;2010年
3 丁丹华;冷榨油茶籽制备油茶籽粕蛋白及多肽的研究[D];华中农业大学;2010年
4 李琦;红色红曲菌交替氧化酶基因Mraox1克隆与功能初步研究[D];华中农业大学;2010年
5 刘吟;双孢蘑菇采后褐变的相关生理生化变化及其保鲜技术研究[D];华中农业大学;2010年
6 王瑞文;紫薇开花生物学特性及杂交育种的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
8 余洋;卤制甲鱼加工工艺及贮藏特性研究[D];华中农业大学;2010年
9 雷莹;柑橘果实化渣性研究[D];华中农业大学;2010年
10 郑芳;茶树接种VA菌根生理生化特性的研究[D];华中农业大学;2010年
【二级参考文献】
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1 杨玉田,郭兴臻,朱宗贵,许杰,马传芝;无糖培养技术在甘薯快繁培养中的应用效果[J];山东农业科学;2002年05期
2 柳建军,于洪欣;菊花外植体分化诱导及植株再生的初步研究[J];山东农业科学;1994年05期
3 于敏,袁萍萍,章莹莹;植物凝集素的部分生物学作用分析[J];安徽农业科学;2002年01期
4 李倩中,李惠芬;我国花卉育种途径及进展[J];安徽农业科学;2002年05期
5 陈凯;植物组织培养中褐变的产生机理及抑制措施[J];安徽农业科学;2004年05期
6 王丽华,王永清,陈文德,彭培好;菊花组织培养技术体系研究[J];安徽农业科学;2005年08期
7 孙磊;张启翔;;地被菊‘北林黄’再生体系的建立及其抗生素敏感性研究[J];安徽农业科学;2006年19期
8 高健,卢惠萍;花卉辐射诱变育种研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;2000年03期
9 王荣富,黄正来,张云华,张乐;粳籼稻亚种苗期叶片荧光特性的研究[J];安徽农业大学学报;2003年01期
10 傅玉兰,郑路;冬菊新品种选育[J];安徽农业大学学报;1994年01期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 郭维明;陈素梅;安小芹;蒋甲福;;中国切花采后生理与技术研究近览[A];中国花卉科技进展——第二届全国花卉科技信息交流会论文集[C];2001年
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1 吴仁海;菊花瘿蚊的生物学特性及菊花对其抗性机制研究[D];河南农业大学;2003年
2 张鸽香;低温胁迫对瓜叶菊几个品系生理反应的影响[D];南京林业大学;2003年
3 艾琳;鲜食葡萄抗寒性研究[D];新疆农业大学;2003年
4 皮伟;根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究[D];西南农业大学;2004年
5 刘军;菊花再生体系的建立及农杆菌介导绿色荧光蛋白(GFP)基因转化的研究[D];山东农业大学;2004年
6 陈旭微;低温胁迫对绿豆和蚕豆下胚轴及子叶抗寒生理特性研究[D];浙江大学;2004年
7 赵耀新;鹿蹄草引种研究[D];河北农业大学;2005年
8 吴娜;卫矛科三种常绿阔叶植物抗寒性研究[D];河北农业大学;2006年
9 林青萍;菊花高效再生体系的建立及GAI基因转化菊花的研究[D];华南热带农业大学;2006年
10 梁慧;菊花高频再生体系建立及根癌农杆菌介导遗传转化体系的优化[D];西南大学;2006年
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1 苏胜举;;出口切花菊生产技术[J];新农业;2009年08期
2 苏军;从几个生理指标探讨不同发育程度切花菊耐藏性的差异[J];亚热带植物科学;1991年02期
3 ;不同药剂对切花菊的保鲜效果[J];河南林业科技;1995年01期
4 吴建设,曾惠兰,黄敏玲,林兵,杨朝阳,叶贻源,叶秀仙;切花菊花期控制与优质栽培技术[J];福建果树;2003年04期
5 唐岱,熊济华,王仕玉;切花菊育种问题探讨[J];云南农业大学学报;2001年01期
6 苏君伟,杨迎东,屈连伟;切花菊“神马”母苗栽培管理技术[J];辽宁农业科学;2005年03期
7 李新;王庆蒙;王明;;切花菊大棚周年栽培技术[J];北方园艺;2010年10期
8 张彦娟;日本切花菊病虫害发生与防治[J];特种经济动植物;2003年06期
9 郭维明,曾武清,陈发棣;乙烯对切花菊衰老的调节[J];南京农业大学学报;1997年04期
10 赵兰勇,刘振宇;切花菊种苗脱毒及病毒检测技术研究[J];中国园林;2001年04期
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1 穆鼎;李春花;;切花菊最优化施肥的初步研究[A];中国园艺学会成立70周年纪念优秀论文选编[C];1999年
2 晏才毅;;切花菊珍品“金宝”[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
3 郑丽;郭维明;;切花菊低温干藏的研究[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
4 周玉欣;杨秀珍;戴思兰;;6-BA延缓切花菊‘优香'叶片衰老作用的研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
5 郭维明;曾武清;陈发棣;;乙烯对切花菊衰老的调节[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
6 郭维明;章志红;房伟民;;6-BA对切花菊瓶插期间生理效应的调节[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
7 章志红;郭维明;;6-BA对切花菊瓶插期间膜透性等生理效应的调节[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
8 李英;曾健滢;潘家强;宁章勇;唐兆新;;5-羟色胺转载体基因表达在肉鸡肺动脉高压综合征发病机制中的作用[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
9 张浩;强巴央宗;彭俊飞;鲍海港;凌遥;吴常信;;鸡内皮型一氧化氮合酶基因克隆与胚胎低氧表达分析[A];中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集[C];2009年
10 房伟民;陈发棣;李倩中;;华东地区切花菊周年供应栽培模式[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 花卉报;我国切花菊生产现状分析[N];山东科技报;2008年
2 本报记者 黄正秉;切花菊生产商抱团意愿明显[N];中国花卉报;2011年
3 本报记者 黄正秉;切花菊保鲜细节不容忽视[N];中国花卉报;2011年
4 科星;切花菊规范化栽培技术[N];福建科技报;2005年
5 吉林 张子旋 林静;切花菊生产技术要点(下)[N];中国花卉报;2004年
6 辽宁省农业科学院花卉研究所 屈连伟;出口切花菊栽培技术[N];中国花卉报;2010年
7 本报特约记者 陆继亮;云南切花菊发展后劲十足[N];中国花卉报;2011年
8 本报记者 黄正秉;优质苗提升切花菊生产水平[N];中国花卉报;2011年
9 黄正秉;日本花卉市场低迷 切花菊生产商欲抱团发展[N];中国特产报;2011年
10 记者 范敏;“双卉新华”切花菊实现周年供应[N];中国花卉报;2010年
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1 郑丽;根癌农杆菌介导SAG_(12)-ipt和3DN-iaaL基因转化切花菊及抗早衰研究[D];西南农业大学;2003年
2 房伟民;嫁接对菊花抗逆性影响及切花菊栽培技术研究[D];南京农业大学;2009年
3 王美玲;番茄景天庚酮糖-1,7-二磷酸酯酶基因的克隆及遗传转化[D];山东农业大学;2011年
4 姜贝贝;菊花侧芽形成过程中内源激素变化及DgLsL基因遗传转化研究[D];南京农业大学;2009年
5 岳兰竹;骨髓增生异常综合征恶性造血克隆的早期识别及根治研究[D];天津医科大学;2010年
6 王顺利;菊花白锈病综合防治及菊花抗病相关基因研究[D];北京林业大学;2008年
7 袁淑娜;彩色棉纤维发育特性以及基于细胞质雄性不育的彩色长绒棉育种研究[D];浙江大学;2009年
8 孙宪芝;菊花光合作用对高温胁迫的响应机理研究[D];山东农业大学;2008年
9 耿业业;育成期蓝狐脂肪消化代谢规律的研究[D];中国农业科学院;2011年
10 李薇;一个水稻E3泛素连接酶OsBBI1在水稻对稻瘟菌广谱抗性中的作用研究[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈琳;切花菊转DdICE1基因研究[D];南京农业大学;2011年
2 吕国胜;木质素与多头切花菊弯颈及蚜虫抗性的相关性研究[D];南京农业大学;2011年
3 韩勇;切花菊品质综合评价体系的构建及性状遗传分析[D];南京农业大学;2011年
4 李娜娜;单头切花菊新品种培育[D];北京林业大学;2012年
5 魏莎;设施园艺(切花菊)连作土壤修复与高效利用研究[D];北京林业大学;2011年
6 郑春雷;不同植物生长调节剂对菊花切花保鲜效果和生理作用的影响[D];河南农业大学;2011年
7 陈龙涛;切花菊采后保鲜技术的应用研究[D];北京林业大学;2005年
8 屈连伟;切花菊腋芽萌发长度与植物内源赤霉素(GA_3)含量的相关研究[D];中国农业科学院;2010年
9 李超;DgDREB1A基因分离及对切花菊的遗传转化[D];东北林业大学;2010年
10 张燕琴;切花菊和香石竹采后主要衰老生理特性研究[D];浙江大学;2004年
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