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《南京农业大学》 2011年
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捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶DNA疫苗的免疫保护作用与烯醇化酶特性的研究

韩凯凯  
【摘要】:捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)属毛圆科(Trichostrongylidae)血矛属(Haemonchus)线虫,分布较广,寄生于反刍动物第四胃,偶见于小肠,因吸血常常导致贫血、消瘦、严重时甚至死亡,对畜牧业造成重大经济损失。目前防治该病方法主要是化学药物驱虫,但由于虫体抗药性的产生以及药物残留和药物污染等问题,迫使人们将注意力转移到利用免疫学方法来防治该病。 本文进行了捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, HcGAPDH)特性研究及其疫苗免疫保护试验;同时对捻转血矛线虫烯醇化酶(Enolase, HcENO)进行了生物学特性研究,克隆得到捻转血矛线虫磷酸甘油酸激酶基因序列并对其进行了生物信息学分析,主要工作如下: 1.捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶特性的研究 根据GenBank上登录的捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因EST序列(登录号为AW670737,登录长度为362bp)设计基因特异性引物,分别利用5’RACE和3’RACE获得该基因5’端未知区和3’端未知区,从而拼接得到HcGAPDH基因的全长cDNA,然后将该序列递交GenBank(登录号为HM145749)。后经分析发现:该基因全长1303bp,含有最大开放阅读框(ORF)为1026bp,5'非翻译区(5'-UTR)长90 bp,3’非翻译区(3'-UTR)长175bp。根据此基因的全长cDNA设计1对特异性引物,以捻转血矛线虫的总RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增出约1000bp的产物,测序结果与推导出的ORF序列一致。BLAST分析后将该片段克隆到pET-28a(+)载体中,转化入感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白。SDS-PAGE结果分析发现融合蛋白在上清和包涵体中均有表达,分子量约38kDa。以自然感染的山羊血清作为一抗,Western blot分析结果显示在38kDa处出现特异性条带。用HcGAPDH表达蛋白的包涵体免疫大鼠制备高免血清做一抗,Western blot分析HcGAPDH基因在捻转血矛线虫的天然表达,结果在38kD处有明显条带,与推测ORF的蛋白大小无明显区别。酶活性测定结果表明该重组蛋白具有一定的甘油醛-3-磷酸脱氢酶催化活性,其最适pH值为8,最适反应温度为40℃。2.捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶虫体组织分布的研究 为了研究捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, HcGAPDH)在虫体中的分布与定位情况,我们应用常规方法表达已构建好的pET28a-HcGAPDH, GE纯化柱纯化后,免疫SD大鼠制备抗血清。浓缩型S-P免疫组化3步法检测HcGAPDH抗原在捻转血矛线虫体内的分布和表达。结果发现,HcGAPDH主要定位于小肠微绒毛上皮,在其他部位则鲜见。 3.捻转血矛线虫pVAX1-HcGAPDH DNA疫苗的构建与体内表达情况的检测 利用DNA重组技术,构建pVAX1-HcGAPDH DNA疫苗。经酶切鉴定后,腿部肌肉免疫小鼠,1周后取肌肉注射部位、非注射部位组织,利用RT-PCR和Western-blot技术分别检测DNA疫苗的转录与表达情况。RT-PCR检测结果显示,小鼠注射部位肌肉所扩增出的目的条带大小约为1000bp,非注射部位中未能检测到目的条带,从而说明重组质粒在注射部位可以成功转录;VVestern blot检测结果发现,在注射部位检测到大小为38kD的目的蛋白条带,而非注射部位未能检测到目的蛋白的条带,这些结果都为下一步的动物保护性试验奠定了基础。 4.捻转血矛线虫pVAX1-HcGAPDH DNA疫苗的免疫保护性试验 使用DNA疫苗pVAX1-HcGAPDH,对9-10月龄山羊做了免疫保护性试验。健康山羊15只,随机分成3组,每组5只。一组免疫100μg pVAX1-HcGAPDH,其他两组为不攻虫对照组和攻虫对照组。在试验山羊的背部皮下多点注射免疫,两个对照组用1m1PBS代替DNA疫苗,一共免疫两次,中间间隔2周。第二次免疫14天后,疫苗免疫组和攻虫对照组山羊口腔接种5000条捻转血矛线虫第三期感染性幼虫。从攻虫后22至34天,每隔一天收集粪便,虫卵计数。攻虫后35天,屠宰山羊并剖解皱胃,分离雌雄虫体,进行成虫计数。同时,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,测定了所有试验山羊血清特异性IgG滴度、血清以及胃粘膜表面和胃粘膜组织匀浆中特异性IgA浓度。在免疫前、首免后14d、二免后14d、攻虫后14d和杀羊前对以下指标进行检测:利用ELISA试剂盒检测血清细胞因子(IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-22)的浓度变化;利用流式细胞术检测了所有试验山羊外周血中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞的变化;利用全自动电子血细胞分析仪对所有试验山羊的外周血中嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞和血红蛋白进行了检测。结果显示,DNA疫苗pVAX1-HcGAPDH免疫山羊后,ELISA检测结果表明血清IgG在首免后14天达到较高水平,二免后抗体水平进一步升高;血清IgA在免疫后出现较高水平的滴度,同时杀羊后发现胃粘膜组织匀浆具有较高的滴度,免疫后山羊CD4+T淋巴细胞、B淋巴细胞水平显著高于不攻虫对照组,同时细胞因子检测免疫组IL-4水平上升显著,IFN-γ、TGF-β、IL-22变化规律性不明显。分析试验山羊血细胞发现,免疫组和攻虫对照组山羊嗜酸性粒细胞浓度显著高于不攻虫对照组。5000条捻转血矛线虫三期幼虫攻击试验山羊后,免疫组虫卵减少率为34.9%,雌虫、雄虫和成虫总数减少率分别为39.23%,36.03%和37.73%,说明pVAX1-HcGAPDH对抵御山羊捻转血矛线虫的感染具有一定效果。 5.捻转血矛线虫烯醇化酶特性的研究 根据GenBank上登录的捻转血矛线虫烯醇化酶(Enolase)基因EST序列(登录号为BF422728,登录长度为482bp)设计基因特异性引物,分别利用5’RACE和3’RACE获得该基因5’端未知区和3’端未知区,从而拼接得到Enolase基因的全长cDNA。分析发现:该基因全长1583bp,含有最大开放阅读框(ORF)为1305bp,5’非翻译区(5'-UTR)长62 bp,3’非翻译区(3'-UTR)长21 6bp。根据Enolase基因的全长cDNA设计1对特异性引物,以捻转血矛线虫的总RNA为模板,采用RT-PCR技术,扩增出约1300bp的产物,将该片段克隆到pET-28a(+)载体中,转化入感受态大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。SDS-PAGE结果分析发现融合蛋白在上清和包涵体中均有表达,分子量约49kDa。以自然感染的山羊血清作为一抗,Western blot结果显示在49kDa处出现特异性条带。HcGAPDH表达蛋白的包涵体免疫大鼠制备高免血清做一抗,用Western blot分析HcGAPDH基因在捻转血矛线虫的天然表达,结果在49kDa处有明显条带,与推测ORF的蛋白大小近似。酶活性测定结果表明该重组蛋白具有一定的烯醇化酶催化活性,其最适pH值为7。 6.捻转血矛线虫磷酸甘油酸激酶的生物信息学分析 根据GenBank上登录的捻转血矛线虫磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase, HcPGK)基因EST序列(登录号为CB192372,登录长度为584bp)设计基因特异性引物,分别利用5'RACE和3'RACE获得该基因5’端未知序列和3’端未知序列,从而拼接得到PGK基因的全长cDNA。利用生物信息学网站的各种在线分析工具,对其进行分析发现:该基因全长1584bp,最大开放阅读框(ORF)为1254 bp,5’非翻译区(5'-UTR)长95 bp,3'非翻译区(3'-UTR)长235 bp。该基因编码417个氨基酸,相对分子量理论预测值为44,594 Da。存在多个潜在的生物活性功能位点,蛋白的理化性质稳定。有17个主要的B细胞抗原表位,这些为下步研究奠定了基础。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S852.73

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 余招锋,于三科,才学鹏;寄生虫的反式剪接研究进展[J];动物医学进展;2004年02期
2 沈喜妹;杨立勇;;3-磷酸甘油醛脱氢酶的多功能性及其在糖尿病的作用[J];福建医科大学学报;2007年05期
3 裴福全;长野功;吴志良;崔惠儿;张贤昌;高桥优三;;华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶基因的分子表达、蛋白纯化与定性[J];华南预防医学;2008年06期
4 赵军明;荣光;王新华;薄新文;;动物寄生虫疫苗的研究进展[J];中国畜牧兽医;2007年07期
5 王凯;;动物核酸疫苗的研究现状及发展前景[J];中国畜牧兽医;2010年08期
6 刘全,张西臣;寄生虫DNA疫苗的研究[J];寄生虫与医学昆虫学报;2003年03期
7 李俊;李祥瑞;;羊捻转血矛线虫免疫机理研究进展[J];寄生虫与医学昆虫学报;2006年02期
8 吴德,吴忠道,余新炳;磷酸甘油酸激酶的研究进展[J];中国热带医学;2005年02期
9 戴佳琳;黄江;廖兴江;;生物信息学分析牛带绦虫烯醇酶基因及其蛋白的结构和特性[J];热带医学杂志;2010年10期
10 杨桂梅,鲍宝龙,任大明;3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白和18SrRNA作为相对定量的内标在牙鲆发育阶段的稳定性比较[J];上海水产大学学报;2005年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 姜宁;日本血吸虫RNA疫苗探索及Sj23抗原对宿主免疫调节机制的研究[D];吉林大学;2009年
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1 邱春辉;日本血吸虫重组烯醇化酶研究[D];福建农林大学;2009年
【共引文献】
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1 刘俊伟;范国英;党光辉;司红英;陈俊杰;;西杂肉牛球虫病的诊断与虫种鉴定[J];安徽农业科学;2011年14期
2 顾冬花;;大通县浅山地区桦林乡绵羊寄生虫调查[J];现代农业科技;2010年16期
3 刘俊伟;姜金庆;李雪华;司红英;谷巧灵;;新乡市待宰猪弓形虫感染的血清学调查与分析[J];现代农业科技;2010年18期
4 王晓平;李文艺;周毅;贺宋文;;花垣与保靖山羊捻转血矛线虫感染情况调查研究[J];现代农业科技;2011年02期
5 洪新雨;崔佳乐;李文臣;陈勃;罗毅男;;人参皂甙Rh2对人脑恶性胶质瘤SHG-44细胞抗肿瘤作用的蛋白质组学分析[J];吉林大学学报(医学版);2009年06期
6 鲍相渤;刘卫东;姜冰;苏浩;李云峰;单忠国;于赫男;赫崇波;;内参基因在虾夷扇贝定量PCR中表达稳定性的比较[J];水产科学;2011年10期
7 曹雯丽;陈亮;刘启生;巴音查汗;;新疆牛环形泰勒虫病的流行现状和防治[J];草食家畜;2011年03期
8 张玉仙;王文利;张凡建;赵庶吏;陈耀星;;北京郊区羊感染捻转血矛线虫情况调查报告[J];当代畜牧;2006年07期
9 王幼宁,刘孟雨,李霞;植物3-磷酸甘油醛脱氢酶的多维本质(英文)[J];西北植物学报;2005年03期
10 顾泽茂,龚小宁,汪建国;锥虫系统发育的研究进展[J];动物学研究;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 顾泽茂;汪建国;;锥虫系统发育的研究进展[A];中国动物学会原生动物学分会第十二次学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
2 卢乃浩;高中洪;;糖尿病大鼠心肌α-烯醇酶的氧化和硝化修饰[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
3 余华;叶健强;;羊寄生虫驱虫药药效评价与分析[A];首届中国兽药大会动物药品学暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集[C];2008年
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1 谢成建;棉花在黄萎病菌侵染早期的蛋白质组及表达谱分析[D];西南大学;2011年
2 王秋红;草原龙胆生殖生物学及其差异蛋白质组学的研究[D];东北林业大学;2011年
3 曹中赞;人工感染传染性支气管炎病毒鸡气管和肾脏的蛋白质组学分析[D];中国农业科学院;2011年
4 张莹;1、卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组的建立 2、ENO1在非小细胞肺癌中的功能研究[D];北京协和医学院;2011年
5 许杨;细胞死亡调控与食管癌化疗敏感性相关研究[D];北京协和医学院;2011年
6 侯洪烈;犬恶丝虫成虫cDNA文库的构建及免疫相关蛋白的研究[D];吉林大学;2011年
7 洪炀;日本血吸虫童虫在不同敏感性宿主体内差异表达蛋白的研究[D];南京农业大学;2011年
8 孙伟;捻转血矛线虫HC29、Dim-1和Lipase基因的克隆及免疫保护作用研究[D];南京农业大学;2011年
9 易道生;捻转血矛线虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆、表达与生物学特性研究[D];南京农业大学;2011年
10 宁长申;河南部分地区猪等孢球虫流行情况调查、致病试验与药物防治[D];南京农业大学;2010年
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1 曹仁祺;日本血吸虫病环介导等温扩增诊断方法的建立和初步应用[D];华中农业大学;2010年
2 纪智星;金黄色葡萄球菌α-烯醇化酶与脂蛋白(a)的相互作用[D];内蒙古农业大学;2010年
3 季华;籽鹅产蛋性状候选基因多态性分析[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
4 高晨;CD44与糖酵解相关分子在胃癌中的表达及意义[D];兰州大学;2011年
5 倪田根;胃癌组织中ENO1、M2-PK的表达与临床病理意义[D];兰州大学;2011年
6 陈春杰;闽花6号花生果皮应答黄曲霉菌侵染的蛋白质组学分析[D];福建农林大学;2011年
7 唐阳;湖南省华支睾吸虫病高发区人群感染现状及影响因素分析[D];中南大学;2010年
8 王利晓;莫尼茨属绦虫节片间部分差异基因表达的研究[D];石河子大学;2010年
9 张兆霞;北京地区致犬皮肤病主要病原调查与鉴定试验[D];石河子大学;2009年
10 孔令琼;黄酒麦曲浸提液的宏蛋白质组学研究[D];江南大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 程国锋,冯新港,林矫矫,石耀军,陆柯,周元聪,蔡幼民;日本血吸虫虫卵、童虫和雌雄成虫膜蛋白的双向电泳[J];动物学报;2005年01期
2 孙军,林矫矫,程国锋,李浩,石耀军,陆珂,蔡幼民,江洪波;利用基因表达谱芯片研究东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后基因的差异性表达[J];北京大学学报(自然科学版);2004年04期
3 蒋次鹏;牛带绦虫病的国内流行和中医药治疗[J];地方病通报;2001年01期
4 史小楚,崔惠儿,阮彩文,周洁娴;快速ELISA、快速斑点ELISA和IHA检测华支睾吸虫病效果的比较[J];广东卫生防疫;1997年03期
5 黄绪强,周碧琪,何广元,钟权昌;IEST和快速ELISA诊断华支睾吸虫病的效果比较[J];广东药学院学报;1999年01期
6 倪永晖;;编码日本血吸虫卵壳蛋白的基因群[J];国外医学(寄生虫病分册);1991年03期
7 李文,马云祥;带绦虫病在我国流行现状[J];河南预防医学杂志;1995年01期
8 华文君;核酸疫苗的应用及研究新进展[J];河南畜牧兽医;2000年10期
9 陈瑞华,陈少强,黄焱,张更,黄登清,陈陙斌,朱学军;糖尿病大鼠视网膜视细胞超微结构病理变化的研究[J];解剖学杂志;2002年03期
10 陈霁明;寄生虫的免疫逃避[J];华北煤炭医学院学报;2004年03期
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中国期刊全文数据库 前10条
1 刘泉;花卫华;徐志伟;;山羊捻转血矛线虫的诊治[J];现代农业科技;2010年13期
2 李俊;李祥瑞;;羊捻转血矛线虫免疫机理研究进展[J];寄生虫与医学昆虫学报;2006年02期
3 荣光;赵军明;郑金海;王新华;薄新文;钟发刚;罗盘琪;任耀军;;捻转血矛线虫虫卵的大量分离纯化[J];中国畜牧兽医;2008年12期
4 赵玉琪;;羊捻转胃虫病的定量研究 粪便虫卵数与虫体总数之间的关系[J];动物医学进展;1983年02期
5 张玉仙;王文利;张凡建;赵庶吏;陈耀星;;北京郊区羊感染捻转血矛线虫情况调查报告[J];当代畜牧;2006年07期
6 王维学;;肝片形吸虫的危害[J];青海畜牧兽医杂志;1982年03期
7 朱彦鹏;X射线照射对绵羊捻转血矛线虫感染性幼虫影响的研究[J];中国兽医科技;1984年11期
8 姚宝安;王祥;夏雪山;赵俊龙;马丽华;孙明;喻子牛;;苏云金芽胞杆菌晶体蛋白对羊捻转血矛线虫成虫的作用[J];中国农业大学学报;1998年S2期
9 薛里;捻转血矛线虫发育期卵的呼吸代谢及对噻苯咪唑的敏感性[J];国际医学寄生虫病杂志;1985年03期
10 朱彦鹏;X射线辐射的捻转血矛线虫第三期幼虫一次免疫绵羊的研究[J];中国兽医科技;1986年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王瑞;杨晓野;刘鑫远;罗晓平;李军燕;;捻转血矛线虫伊维菌素耐药株虫体P-糖蛋白基因的多态性分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
2 王瑞;杨晓野;刘鑫远;曲娜;蔡葵蒸;;捻转血矛线虫耐苯并咪唑虫株与敏感虫株P-gp基因的比较分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
3 王瑞;杨晓野;王辰君;刘鑫远;蔡葵蒸;;耐伊维菌素捻转血矛线虫虫株与敏感虫株P-糖蛋白基因分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
4 杜爱芳;李孝军;王素华;;捻转血矛线虫ZJ株24kDa 分泌排泄(ES)蛋白基因在大肠杆菌中的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
5 张玉仙;王文利;张凡建;赵庶吏;陈耀星;;北京郊区羊感染捻转血矛线虫情况调查[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
6 顾小龙;;羊混合感染捻转血矛线虫和美丽筒线虫的诊治[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
7 杜爱芳;李孝军;侯玉慧;王素华;;捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
8 李孝军;杜爱芳;;捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株24kDa分泌排泄(ES)蛋白基因的克隆和序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
9 严若峰;李祥瑞;;捻转血矛线虫H11基因在巴斯德毕赤酵母中表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
10 杜爱芳;李孝军;侯玉慧;;捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株15kDa分泌排泄(ES)蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
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1 杨世友 胡远利;羊捻转血矛线虫病的诊断与防治[N];中国畜牧报;2002年
2 李胜武 冯信远 王自军;小尾寒羊病虫防制[N];江苏农业科技报;2003年
3 北京中农华威科技有限公司 游锡火;牛羊寄生虫病程序化防治模式[N];中国畜牧水产报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 闫峰宾;捻转血矛线虫成虫免疫蛋白组和比较蛋白组研究[D];南京农业大学;2009年
2 韩凯凯;捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶DNA疫苗的免疫保护作用与烯醇化酶特性的研究[D];南京农业大学;2011年
3 孙伟;捻转血矛线虫HC29、Dim-1和Lipase基因的克隆及免疫保护作用研究[D];南京农业大学;2011年
4 孙延鸣;捻转血矛线虫半乳糖结合凝集素生物学功能研究[D];南京农业大学;2006年
5 张红丽;捻转血矛线虫滞育相关基因daf-22和hsp70全基因的获得及其功能的研究[D];浙江大学;2012年
6 薄新文;捻转血矛线虫BZ抗性等位基因多重PCR检测及新基因Hc38的克隆、表达与特性分析[D];南京农业大学;2005年
7 Charles Inyagwa Muleke;捻转血矛线虫HC58 cDNA基因的分子克隆和功能特性的研究[D];南京农业大学;2006年
8 易道生;捻转血矛线虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆、表达与生物学特性研究[D];南京农业大学;2011年
9 周前进;利用秀丽隐杆线虫表达捻转血矛线虫H11蛋白的转基因研究[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 牛延萍;捻转血矛线虫过氧化物酶基因的克隆和5种蛋白的抗原特性分析[D];南京农业大学;2012年
2 沈效平;湖南山羊捻转血矛线虫感染调查及rDNA ITS遗传差异分析[D];湖南农业大学;2013年
3 王晓平;湘西保靖县山羊捻转血矛线虫感染情况调查及药物驱虫试验[D];湖南农业大学;2012年
4 赵媛媛;捻转血矛线虫体外培养条件优化和H11蛋白提取及氨肽酶活性分析[D];东北农业大学;2010年
5 张志凯;捻转血矛线虫新基因Hcher-1和HcMSP的克隆与阶段性表达特性分析[D];南京农业大学;2011年
6 刘鑫远;捻转血矛线虫抗伊维菌素虫株P-糖蛋白基因多态性研究[D];内蒙古农业大学;2012年
7 荣光;应用RNAi技术研究捻转血矛线虫Hc38基因的生物学功能[D];石河子大学;2007年
8 张立武;重组捻转血矛线虫半乳糖结合凝集素免疫山羊真胃细胞因子表达定位[D];南京农业大学;2007年
9 王倩囡;捻转血矛线虫H15 ES抗原基因的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立[D];东北农业大学;2009年
10 王婧;捻转血矛线虫Galectin C端CRD差异氨基酸突变对其生物学活性的影响[D];南京农业大学;2007年
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