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《南京农业大学》 2010年
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托盘和真空包装冷却猪肉冷藏过程中菌相变化规律研究

江芸  
【摘要】:冷却肉处于低温环境中,许多细菌的生长受到抑制,但肉中污染的一些嗜冷菌,在冷藏条件下仍然会大量生长和繁殖,最终导致冷却肉发生腐败变质。关于冷却肉污染微生物及贮藏过程中微生物的动态变化已有很多研究报道,但大多是基于传统微生物培养手段,而许多基于传统方法的研究并不能全面反映冷却肉中微生物动态变化的真实情况。近年来,基于16S rRNA基因分子技术正被越来越多地应用于食品微生物群落结构的研究。本研究的目的是运用变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)、末端限制性长度多态性(Terminal restriction fragment length polymorphism, TRFLP),分析托盘包装冷却猪肉冷藏过程中菌相变化,运用DGGE及传统乳酸菌分离纯化技术,分析真空包装冷却猪肉冷藏过程中菌相变化,确定冷却猪肉两种包装方式下主要优势腐败菌,进一步运用Real-time PCR方法对主要优势腐败菌进行定量分析,进而揭示其贮藏过程中菌相变化规律,为控制肉品污染,提高产品质量安全提供科学依据。具体研究内容和结果如下: 1.冷却猪肉不同前处理对细菌DNA提取及PCR-DGGE的影响 运用分子生物学方法研究微生物的第一步骤就是样品DNA提取。前处理方法不同可能会影响DNA提取效果并进而影响后续的PCR等实验结果,故本实验比较研究冷却猪肉不同前处理对细菌DNA提取及PCR-DGGE的影响。冷却猪肉4℃贮藏至第5天时,分别采用冻融、超声、摇床和匀浆前处理后,提取肉中细菌DNA,进行Dilution-PCR和DGGE分析。结果表明,不同前处理方法所制备的DNA量稍有差别,而细菌16S rRNA基因V3区和V6-V8区PCR-DGGE结果无显著差异,所以可根据实际情况选择上述不同前处理方法,结合本实验室实际条件和本实验具体要求,确定后续实验样品前处理采用摇床法。同时对16S rDNA V3区的DGGE图谱进行割胶测序,检测到腐败菌主要是假单胞菌属,其他还有不动杆菌属、环丝菌属和沙雷氏菌属。 2.托盘包装冷却猪肉冷藏过程中菌相变化研究 运用PCR-DGGE、TRFLP技术,研究托盘包装冷却猪肉冷藏过程中的菌相变化,确定主要优势腐败菌,进一步运用Real-time PCR中的△△CT方法对该菌进行定量研究。结果如下: 选择性培养计数结果表明,贮藏过程中假单胞菌增长最为迅速,热死环丝菌和假单胞菌成为冷却猪肉贮藏末期主要优势腐败菌。直接提取冷却猪肉细菌DNA,其Dilution-PCR结果表明随着贮藏时间的延长,冷却肉中细菌量逐渐增多,这种半定量方法结果与传统培养计数结果趋势一致。可培养细菌的16S rRNA基因V3区和V6-V8区DGGE结果表明,冷却猪肉中可培养细菌的组成在不同贮藏时期是不同的。可培养细菌与不经培养直接提取冷却猪肉细菌DNA同时进行PCR-DGGE,16S rRNA基因V3区和V6-V8区DGGE图谱存在差异。 直接提取冷却猪肉细菌DNA,分别对16S rRNA基因V3和V6-V8可变区进行PCR-DGGE分析,结合克隆测序,结果表明肉中初始菌相较复杂,贮藏末期主要优势腐败菌为假单胞菌,但V3可变区发现还有热死环丝菌,不同可变区结果不完全一致。本实验所得的假单胞菌克隆,基于不同可变区的DGGE分析,亦发现基于不同可变区进行DGGE研究时结果存在差异。 直接提取冷却猪肉细菌DNA,进行PCR-TRFLP分析,同时结合16S rRNA基因克隆文库和测序方法,得到的TRFLP图谱中共产生35种谱带,表明冷却肉中微生物组成十分复杂,对应于假单胞菌的谱带峰贮藏过程中变化明显,其相对峰面积由O d的5.7%至贮藏末期达到83.4%,表明主要优势腐败菌为假单胞菌。 运用Real-time PCR相对定量方法分析托盘包装肉样中假单胞菌。肉样中假单胞菌与总细菌两组标准曲线的斜率差值为0.004,小于0.1,表明两个基因的扩增效率已非常接近,可用AACT法对假单胞菌进行相对定量分析。AACT法相对定量表明贮藏过程中肉样中假单胞菌增长迅速,从0 d的小于0.001至贮藏末期达到4.438,在总细菌中所占比例迅速增高。 综上所述,运用PCR-DGGE、TRFLP技术,研究托盘包装冷却猪肉冷藏过程中的菌相变化,确定主要优势腐败菌为假单胞菌,进一步运用Real-time PCR中的△△CT相对定量方法发现该菌增长迅速。三种方法证实了托盘包装冷却猪肉冷藏过程中假单胞菌为主要优势腐败菌。 3.真空包装冷却猪肉冷藏过程中菌相变化研究 真空包装冷却猪肉冷藏过程中,分离纯化乳酸菌,运用PCR-DGGE研究贮藏过程中乳酸菌的变化,同时不经培养直接提取肉中细菌DNA,运用PCR-DGGE及Lactobacillus group-specific PCR-DGGE方法,研究其贮藏过程中的菌相变化,确定主要优势腐败菌。进一步运用Real-time PCR中的△△CT方法对该菌进行定量研究。结果如下: 选择性培养计数结果表明,真空包装条件下乳酸菌生长迅速,而其他细菌生长受到抑制,4℃贮藏时冷却猪肉货架期接近14 d。MRSA分离纯化的乳酸菌,运用PCR-DGGE结合16Sr RNA基因序列分析,真空包装冷却猪肉中共获得8种乳酸菌。不同贮藏时间乳酸菌组成不同,清酒乳杆菌成为贮藏末期最主要的乳酸菌,占71.4%。 直接提取冷却肉细菌DNA,对16S rRNA基因V3区进行PCR-DGGE分析,结合割胶测序,结果表明贮藏末期乳酸菌(肉食杆菌、清酒乳杆菌、乳球菌)成为优势腐败菌。运用Lactobacillus group-specific PCR-DGGE研究发现,真空包装冷却猪肉冷藏过程中乳杆菌样细菌逐渐增多,贮藏末期清酒乳杆菌最多。 运用Real-time PCR (?)目对定量方法分析真空包装肉样中乳酸杆菌。肉样中乳酸杆菌与总细菌两组标准曲线的斜率差值为0.096,小于0.1,表明两个基因的扩增效率已非常接近,可用△△CT法对乳酸杆菌进行相对定量分析。△△CT法相对定量表明贮藏过程中肉样中乳酸杆菌增长迅速,从0 d的小于0.001至贮藏末期达到3.696,在总细菌中所占比例迅速增高。 综上所述,运用PCR-DGGE及Real-time PCR方法,确定真空包装冷却猪肉冷藏过程中乳酸杆菌为主要优势腐败菌。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:TS251.51

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【引证文献】
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1 赵国娇;王宏勋;;真空包装鲜切紫薯的菌相研究[J];食品科学;2012年13期
【参考文献】
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1 罗佳捷;李丽立;张彬;;T-RFLP技术及其在微生物群落结构研究中的应用[J];中国畜牧兽医;2009年07期
2 梁晓媛,龚瑶琴;PCR技术在cDNA文库构建中的应用[J];国外医学.遗传学分册;2001年01期
3 任南琪;赵阳国;高崇洋;王爱杰;;TRFLP在微生物群落结构与动态分析中的应用[J];哈尔滨工业大学学报;2007年04期
4 诸永志;姚丽娅;王道营;徐为民;汪志君;曹建民;;冷却羊肉微生物菌群分析与鉴定[J];江西农业学报;2009年03期
5 李献梅;王小芬;崔宗均;;末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP)在微生物群体分析上的应用与技术优化[J];中国农业大学学报;2009年04期
6 图雅,朱伟云,陆承平;用于虎粪微生物区系分子生态学研究的核酸提取方法的筛选[J];农业生物技术学报;2005年04期
7 白凤翎;李鸿雁;;肉品微生物污染现状分析与安全对策[J];肉类工业;2007年12期
8 罗欣,朱燕;乳酸钠在牛肉冷却肉保鲜中的应用研究[J];食品与发酵工业;2000年03期
9 付琳琳;曹郁生;李海星;陈燕;;应用PCR-DGGE技术分析泡菜中乳酸菌的多样性[J];食品与发酵工业;2005年12期
10 张德权;王宁;王清章;李淑荣;;真空条件下冷却羊肉的菌相消长规律[J];食品科学;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 李献梅;王小芬;高秀芝;杨洪岩;崔宗均;;T-RFLP技术对家庭传统自制豆酱和酱油发酵过程中微生物动态变化和多样性的分析[A];第十次全国环境微生物学术研讨会论文摘要集[C];2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 尤向峰;;冷却肉抑菌保鲜技术的研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年19期
2 江芸;高峰;徐幸莲;周光宏;;PCR-DGGE技术及其在发酵食品微生物研究中的应用[J];安徽农业科学;2007年21期
3 李华兰;王涛;李沁元;张东华;彭谦;崔晓龙;;滇西二高温热泉原核生物多样性的比较分析[J];安徽农业科学;2009年28期
4 曾晓房;林惠珍;邝智祥;唐秀山;白卫东;;冰鲜肉中腐败菌的研究现状[J];安徽农业科学;2010年34期
5 王艳梅;肖小发;陆剑锋;李文龙;吴青;卜兴军;李兴江;;L-乳酸在湿木耳保鲜中的抑菌效果研究[J];安徽农业科学;2011年27期
6 柏耀辉;孙庆华;温东辉;唐孝炎;;分子生态技术在微生物硝化及反硝化研究中的应用[J];北京大学学报(自然科学版);2011年02期
7 杨玲;俞妹娟;杨卫景;马先进;洪杰;;PCR-DGGE技术及其在微生态研究中的应用[J];浙江畜牧兽医;2009年04期
8 高秀红;高大文;;A/O-MBR工艺不同污泥停留时间下脱氮效能的分析[J];东北林业大学学报;2011年11期
9 黄恩平;姚君;杨翠兰;罗深秋;;抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB和细胞因子表达的影响[J];南方医科大学学报;2011年02期
10 李秀桂;唐振柱;黄彦;黄兆勇;王红;吕素玲;黄立嵘;诸葛石养;车光;;即食凉拌食品中微生物污染调查分析及大肠菌群限量探讨[J];公共卫生与预防医学;2009年03期
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1 谢主兰;梁丽简;黄和;;软包装即食海蜇丝的品质特征和细菌学安全分析[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
2 张德权;王宁;王清章;李淑荣;;应用Nisin、溶菌酶和乳酸钠复合保鲜冷却羊肉研究[A];2010中国羊业进展[C];2010年
3 李翠萍;刘文君;温柔;;氯和氯胺对给水管网微生物生长特性影响研究[A];饮用水安全控制技术会议暨中国土木工程学会水工业分会给水委员会第13届年会论文集[C];2013年
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1 王宏;毛竹林生态型模式施肥应用研究[D];北京林业大学;2011年
2 姚君;携带hIL-10基因的双歧杆菌治疗小鼠溃疡性结肠炎的研究[D];暨南大学;2011年
3 李蓓;蒙古马毛色性状相关基因多态性分析及组织表达研究[D];内蒙古农业大学;2011年
4 王俊;油藏产气微生物代谢机理研究[D];中国科学院研究生院(渗流流体力学研究所);2011年
5 万春黎;电渗析-微生物技术修复油污土壤的效能及影响因素研究[D];哈尔滨工业大学;2010年
6 任红燕;油藏原位与实验室模拟系统中的微生物分子生态学研究[D];上海交通大学;2011年
7 王永生;奶牛子宫内膜炎真菌病原nest PCR-DGGE检测方法建立及临床应用效果研究[D];吉林大学;2011年
8 张维;准好氧填埋场CH_4减排和加速稳定化的微生物学机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
9 韩衍青;应用超高压技术延长低温火腿的货架期[D];南京农业大学;2011年
10 龚敏;小麦非淀粉多糖对断奶仔猪肠道菌群区系及糖转运载体的影响研究[D];南昌大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭亮;干扰—沉积物再悬浮对浮游细菌群落结构和多样性的影响[D];华中农业大学;2010年
2 薛妍;肠道菌对苏云金芽胞杆菌棉铃虫杀虫活性的作用[D];华中农业大学;2010年
3 苏晓东;氯化汞对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素表达的影响[D];郑州大学;2010年
4 刘尧;玉米秸秆腐解复合菌系CSS-1的构建、菌群组成及腐解特性研究[D];山东农业大学;2010年
5 宋洪宁;东平湖沉积物细菌多样性分析[D];山东农业大学;2010年
6 丁玉;肉牛屠宰工序与低温贮藏时间对牛肉表面微生物多样性影响的研究[D];山东农业大学;2010年
7 管红娟;EAA构成与碳水化合物类型对混合瘤胃微生物体外发酵的影响[D];山东农业大学;2010年
8 盛海圆;传统泡菜中乳酸菌的分离鉴定及其多样性分析[D];安徽农业大学;2010年
9 姜荧安;荧光定量PCR检测哈维氏弧菌活的非可培养状态过程中的基因表达[D];中国海洋大学;2010年
10 刘涛;模拟油藏条件下激活剂运移与微生物生长调控实验研究[D];中国海洋大学;2010年
【同被引文献】
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1 何建军,周明全,胡中立,张金木,郑威;真空包装冷藏生鲜净菜莲藕的研制[J];湖北农业科学;2002年06期
2 杨朝霞,王亦军,高磊;紫甘薯花色苷色素研究进展[J];青岛大学学报(工程技术版);2004年02期
3 陈功,余文华,徐德琼,肖颜林,李洁芝;天然保鲜剂在净菜加工中的应用研究[J];食品工业科技;2005年06期
4 刘超群;王宏勋;宫智勇;;冷鲜猪肉内外细菌菌群分离鉴定及变化规律研究[J];食品科学;2011年23期
5 胡萍;徐幸莲;周光宏;李虹敏;谢伟;徐舶;;真空包装烟熏火腿切片主要腐败菌的分离及分子快速鉴定[J];食品研究与开发;2010年09期
6 陈彬;鲁绯;王夫杰;刘欢;程永强;殷丽君;;酱油增香发酵用耐盐酵母菌的生理生化特性分析及菌种鉴定[J];中国酿造;2010年11期
【二级引证文献】
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1 陈振青;王尚玉;王宏勋;;不同真空包装净菜菌相组成及生长趋势比较[J];食品工业科技;2013年04期
2 夏天龙;姜梅;王宏勋;赵国娇;;鲜切紫薯中酵母菌和乳酸菌货架期模型的构建[J];食品科学;2014年18期
3 王宏勋;赵国娇;方兰兰;;鲜切莲藕中植物乳杆菌生长预测模型研究[J];中国酿造;2012年12期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 任南琪;赵阳国;高崇洋;王爱杰;;TRFLP在微生物群落结构与动态分析中的应用[J];哈尔滨工业大学学报;2007年04期
2 赵勇,周志华,李武,刘彬彬,潘迎捷,赵立平;土壤微生物分子生态学研究中总DNA的提取[J];农业环境科学学报;2005年05期
3 黄祖新;微生物分子生态学技术应用于大曲酒的微生物学研究[J];酿酒科技;2005年05期
4 曾哲灵,熊华;美国肉禽屠宰、加工厂(场)食品安全管理新法规[J];中国禽业导刊;1999年08期
5 尤文辉,王永林,谢华;HACCP在生猪屠宰加工中的应用[J];肉类工业;2000年04期
6 张子平;深化冷却肉加工技术的研究[J];肉类工业;2000年07期
7 朱德修;生猪屠宰加工[J];肉类工业;2000年10期
8 孙承锋,戴瑞彤,曲富春,陈斌;微生物与肉类食品的腐败[J];肉类研究;2001年01期
9 匡治州,许杨;核糖体rDNAITS序列在真菌学研究中的应用[J];生命的化学;2004年02期
10 罗欣,朱燕;乳酸钠在牛肉冷却肉保鲜中的应用研究[J];食品与发酵工业;2000年03期
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1 王英若;略论肉类冷冻工艺问题[J];中国食品;1979年05期
2 董寅初;冷却肉将成为大城市生肉消费的新秀[J];中外食品;1999年01期
3 张子平;冷却肉的加工技术及质量控制[J];食品科学;2001年01期
4 王仲礼;肉类行业如何应对国际市场竞争[J];肉类工业;2005年01期
5 ;双汇冷却肉:以概念传播方式销售产品[J];农村养殖技术;2006年09期
6 ;买肉最好选择冷却肉[J];农村养殖技术;2007年22期
7 王青霞;浅析冷却肉的成熟性状与冷冻工艺[J];肉类工业;1997年04期
8 ;冷却肉专题研究——征稿启事[J];肉类研究;2007年11期
9 ;小包装冷却肉将盛行[J];甘肃科技纵横;1995年06期
10 杨勇;小包装冷却肉的加工[J];肉类工业;1998年07期
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1 黄燕;刘力;;壳聚糖保鲜研究及其在冷却肉保鲜中的应用[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
2 姚艳玲;贺稚非;李洪军;袁先群;蒋丽施;李燕利;付军杰;全拓;;不同贮存温度对冷却肉品质变化的研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
3 段静芸;徐幸莲;周光宏;;壳聚糖和气调包装在冷却肉保鲜中的应用[A];2001年肉类科技交流会暨中国畜产品加工研究会第三届肉类科技大会论文集[C];2001年
4 黄伟林;王崇林;徐晖;王宝国;孟繁胜;吴振岭;戴跃;董霞;;壳聚糖在冷却肉辐照保鲜中的应用[A];第四届中国核学会省市区“三核”论坛论文集[C];2007年
5 孔保华;刘柳;;香辛料提取物在培养基及冷却猪肉中对单核细胞增生性李斯特菌的抑制作用[A];2007年学术年会论文集[C];2007年
6 郑明锋;王则金;陈丽娇;;气调包装结合抑菌处理对冷却猪肉保鲜效果的影响研究[A];2005福建省冷藏技术研讨会论文资料集[C];2005年
7 王根才;陈绍军;白艳红;李莉;王梅英;;超高压处理对冷却肉抑菌效果的影响[A];福建省农业工程学会2006年学术年会论文集[C];2006年
8 肖虹;谢晶;;不同贮藏温度下冷却肉品质变化的实验研究[A];第六届全国食品冷藏链大会论文集[C];2008年
9 戴瑞彤;南庆贤;;冷却肉颜色评定方法探讨[A];2001年肉类科技交流会暨中国畜产品加工研究会第三届肉类科技大会论文集[C];2001年
10 姚艳玲;贺稚非;李洪军;袁先群;蒋丽施;李燕利;付军杰;全拓;;包装材料对高氧气调包装冷却肉品质变化的影响[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈赛 刘冬明;湖南冷却肉减菌降耗研究通过专家鉴定[N];中国食品质量报;2009年
2 刘国信;冷却肉将成新宠[N];中国质量报;2003年
3 徐恒杰 筱涛;冷却肉成消费新宠[N];中国食品质量报;2000年
4 本报特约记者 辜国材;冷却肉市场前景看好[N];中国商报;2002年
5 本报特约记者聂春林;中粮4亿下注“冷却肉”[N];21世纪经济报道;2003年
6 中国农业科学院畜牧研究所专家 孙宝忠 杨季 马爱进;我国冷却肉为何未能快速发展[N];中国乡镇企业报;2001年
7 位天军;冷却肉将成为生肉消费主流[N];农民日报;2001年
8 ;冷却肉加工关键技术[N];科技日报;2006年
9 牛春安;得利斯集团倾力打造冷却肉名牌[N];中国食品质量报;2007年
10 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 孙宝忠;吃肉当选冷却肉[N];健康报;2007年
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1 甄少波;待宰对猪应激及冷却肉品质影响机理研究[D];中国农业大学;2013年
2 江芸;托盘和真空包装冷却猪肉冷藏过程中菌相变化规律研究[D];南京农业大学;2010年
3 陈韬;宰后肌肉蛋白质和组织结构变化与冷却猪肉持水性的关系研究[D];南京农业大学;2005年
4 林朝朋;生鲜猪肉供应链安全风险及控制研究[D];中南大学;2009年
5 朱学伸;家禽“类PSE肉”的品质特性及其改善因素研究[D];南京农业大学;2011年
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1 刘冬明;冷却肉降耗技术研究[D];湖南农业大学;2011年
2 闫孝柱;希悦尔公司冷却肉收缩包装袋在华营销策略研究[D];上海交通大学;2009年
3 戴奕杰;冷却肉中假单胞菌生长动力学模型的建立及微生物预测预报[D];湖南农业大学;2011年
4 朱巧旋;壳聚糖复合生物保鲜剂对冷却肉保鲜品质影响研究[D];集美大学;2012年
5 张莉莉;复合生物保鲜剂对延长冷却肉货架期效果的研究[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
6 赵建生;冷却肉保鲜技术研究[D];西北农林科技大学;2010年
7 周玄;宰后处理方式对冷却肉保水性的影响研究[D];湖南农业大学;2012年
8 殷锟;提高冷却肉保水性的工艺优化研究[D];湖南农业大学;2012年
9 汪晓鸣;辐照与山楂黄酮对冷却猪肉品质的影响[D];南京农业大学;2011年
10 肖虹;冷却肉气味指纹识别技术及冷链中RFID技术应用的研究[D];上海海洋大学;2011年
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