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《南京农业大学》 2009年
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内生多粘芽孢杆菌纤溶酶的纯化、性质及其基因的克隆与表达

吕凤霞  
【摘要】:血栓栓塞性疾病严重危害人类健康和生命,溶栓疗法是治疗血栓栓塞性疾病最为有效并且可靠的手段。目前临床应用的溶栓药物疗效肯定,明显降低了患者的死亡率和致残率,但还存在特异性不高、半衰期短、易出血及再栓塞等缺点。因此迫切需要研制开发高效、特异、安全、副作用小、价廉的新型溶栓药物。已有研究表明,许多中药具有抗血小板聚集、抗血栓形成的作用,包括生物碱类、黄酮类以及皂甙等化合物,尤其是活血化瘀中草药具有不同程度的抗凝血、血小板聚集及溶解血栓的作用。生活在植物组织内的内生菌,由于内生菌与宿主植物长期协同进化过程中,彼此构成了稳定的生态关系,使内生菌具有产生某些与植物相同或相似化合物的能力。鉴于此,从中药植物内生菌资源中可寻找和发现一些新型的溶栓药物。 本研究首次在内生细菌中筛选分离到一株具有纤溶活性较高和良好体外溶栓效果的EJS-3菌株,对其进行了形态特征、生理生化特征和分子生物学鉴定,并对内生多粘芽孢杆菌纤溶酶的分离纯化及其性质进行深入的研究。同时,采用基因工程技术将内生多粘芽孢杆菌纤溶酶基因克隆到表达载体上,实现内生多粘芽孢杆菌纤溶酶异源表达,并对表达产物的提纯和重组酶的酶学性质作了初步探讨,为研制和开发新型的溶栓药物提供重要理论依据。主要研究结果分述如下: 1.采用酪蛋白平板和纤维蛋白平板初筛、摇瓶复筛的筛选策略,从金银花、黄芩、蒲公英、黄连、连翘、爬山虎、鱼腥草、百部等植物的根、茎、叶分离筛选到7株具有纤溶活性的内生菌。其中从百部中分离到的内生菌株EJS-3酶活最高,达110 IU/mL。通过对其形态特征、生理生化特征进行鉴定,初步判断该菌株为多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。对菌株EJS-3的16S rDNA进行PCR扩增,对得到的1500bpPCR产物纯化和序列测定,利用GenBank数据库进行同源搜索,并构建N-J系统发育树,结果表明:菌株EJS-3的16S rDNA序列(DQ120522)与多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)的16S rDNA序列的同源性均达98%以上,亲缘关系最近。结合常规的形态特征、生理生化特征鉴定,表明该菌株在细菌系统分类学上属于多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。目前,国内外内生多粘芽孢杆菌产纤溶酶的研究尚未见报道。 2.内生菌株EJS-3发酵液经离心除菌,硫酸铵分级沉淀,Hiprep phenyl FF疏水层析,RESOURCEM Q离子交换层析和Sephacryl S-300HR凝胶过滤,获得电泳纯的多粘芽孢杆菌纤溶酶(PPFE-Ⅰ), HPLC为单一峰,纯度为94.1%。每升发酵液中可获得1.6 mg活性蛋白,每毫克蛋白活力达2096 IU,纯度提高了14.5,回收率为3.3%。 3. SDS-PAGE测定PPFE-Ⅰ的相对分子质量为63 KDa, MALDI-TOF质谱法准确测定其相对分子质量为63.3 KDa。该酶最适反应温度37℃,最适反应pH7.5,具有较好的热稳定性和pH稳定性。金属离子Cu2+和Ca2+能抑制其纤溶活性, Mg2+, Fe2+和Zn2+对该酶存在明显的激活作用。1 mmol/L PMSF完全抑制其纤溶活性,EDTA能部分抑制纤溶活性,这表明PPFE-Ⅰ属于丝氨酸蛋白酶,此酶还可能是一种金属蛋白酶。 4.利用几种人工合成的底物测定水解酰胺键活性的高低。结果表明,PPFE-Ⅰ的最适底物是枯草杆菌蛋白酶或胰凝乳蛋白酶的最适底物,即N-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe -pNA;水解生色底物N-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA的米氏常数Km为0.20 mM,表明PPFE-Ⅰ对该底物有较好的亲和性;PPFE-Ⅰ在普通纤维蛋白平板和加热平板上测定的纤溶活性没有显著的差别,这表明PPFE-Ⅰ对纤维蛋白具有直接的降解作用,不具有激活纤溶酶原形成纤溶酶的活性,因而PPFE-Ⅰ是一种纤溶酶,而不是纤溶酶原激活剂;通过PPFE-Ⅰ对人血纤维蛋白原的体外降解过程的研究,结果表明纤溶酶PPFE-Ⅰ最先降解α链,其次是β链,而对γ链降解最缓慢,1-4 h逐渐降解至完全;通过体外血凝块的溶解作用实验,结果表明当PPFE-Ⅰ酶溶液对血凝块作用24h时,其对体外血凝决的溶解率91.33%,表明PPFE-Ⅰ有明显的体外溶栓作用,直接溶解作用的结果,同时具有显著的抗凝活性,并且抗凝血效果优于尿激酶。 5.为了实现内生多粘芽孢杆菌纤溶酶的异源高效表达,以内生菌株EJS-3基因组DNA为模板,运用PCR扩增PPFE-Ⅰ基因,并克隆到pMD-19T载体上,构建克隆载体pMD-PPFE-Ⅰ,经测序正确后,将PPFE-Ⅰ克隆至表达载体pET-DsbA上,成功构建了pET-DsbA/PPFE-Ⅰ重组表达质粒,将其转化E. coli BL21(DE3)中,在IPTG诱导下实现了融合蛋白DsbA-PPFE-Ⅰ的表达,表达产物酶活性达228 IU/mL.表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。SDS-PAGE电泳检测融合蛋白主要以可溶形式表达,占菌体总蛋白的18.4%。Western blot结果表明在相应分子量处有一条特异性条带,证实该蛋白为DsbA-PPFE-Ⅰ融合蛋白。 6.表达产物通过Ni亲和柱、凝血酶酶切及Sephadex G-100等步骤进行分离纯化,并用MALDI-TOF质谱对重组酶进行了鉴定。纯化后的表达产物在纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶活性。对纯化的重组纤溶酶进行最适温度及其稳定性、最适pH及其稳定性以及蛋白酶抑制剂、金属离子的影响等性质的研究,结果表明,重组酶与天然纤溶酶是一致的。 7.为了进一步探讨内生多粘芽孢杆菌纤溶酶基因异源表达特性,从内生菌株EJS-3总DNA中PCR扩增出PPFE-Ⅰ基因,将PPFE-Ⅰ基因克隆到本实验室构建大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pHPQ中,并转化枯草杆菌WB800中进行了分泌表达,在含氯霉素10μg/mL.红霉素10μg/mL的LB液体培养基中培养32h,纤溶酶活性为60 IU/mL.
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R378

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 璩竹玲,刘赛,刘晨光,刘万顺;海洋假单胞菌碱性蛋白酶的纤溶及抗血栓形成作用[J];青岛大学医学院学报;2003年02期
2 孙雷,黄仪秀,朱圣庚;噬菌体单链抗体导向溶栓剂的构建[J];北京大学学报(自然科学版);2000年06期
3 罗权;邓志威;王金凤;;鼻咽癌NAP1(18~44)融合表达载体的构建、表达纯化及初步研究[J];北京师范大学学报(自然科学版);2007年05期
4 谢文光,魏钰书,王会信,周良玉,周承富,蒋滋慧;活血化瘀中药的纤溶和纤溶抑制作用[J];中国医药学报;1996年06期
5 黄志立,罗立新,凌均建,杨汝德,梁世中;纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];广东药学院学报;2000年04期
6 黄志立,罗立新,杨汝德,梁世中;纳豆激酶基因重组质粒在大肠杆菌与毕赤酵母中的稳定性[J];广东药学院学报;2001年04期
7 丁文惠,李建平,张宝娓,高亢,张钧华;基因重组链激酶静脉溶栓治疗急性心肌梗塞临床研究[J];中国临床药理学杂志;2000年04期
8 王梅霞,陈双林,霍娟;一株银杏内生真菌的分离及其产黄酮类物质的初步研究[J];工业微生物;2004年02期
9 闫达中,许芳,李洁,冯建成,杨艳燕;纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌中活性表达研究[J];湖北大学学报(自然科学版);2003年01期
10 许芳,冯建成,李洁,石衍君,杨艳燕;重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究[J];湖北大学学报(自然科学版);2004年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 郭晓军;假蕈状芽孢杆菌34KD纤溶酶基因的克隆与表达[D];河北农业大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 和智君,汪旭;阿托品对中国仓鼠V79细胞有丝分裂过程的影响[J];癌变.畸变.突变;1999年03期
2 徐忠东,彭景中;线粒体与细胞凋亡[J];安徽教育学院学报;2001年06期
3 解永梅;张成玲;赵永强;张薇;张广民;;山东省大白菜黑腐病病原的鉴定及其生物学特性的研究[J];山东农业科学;2007年06期
4 姚良同;丁延芹;刘尧;陈一然;杜秉海;李俊;;玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验[J];山东农业科学;2008年03期
5 朱彭玲;陈强;丁延芹;姚良同;杜志兵;王晶;杜秉海;;新疆地区棉花根际拮抗菌的筛选与鉴定[J];山东农业科学;2008年06期
6 张广志;周红姿;杨合同;赵晓燕;;盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定[J];山东农业科学;2008年09期
7 张一;王凤忠;张铭铄;李妍;韩明渠;周波;毛志泉;;苹果园土壤中一株根皮苷降解菌的筛选[J];山东农业科学;2011年12期
8 凌晨;刘波;;2,4,6-三溴苯酚降解菌的筛选[J];安徽化工;2012年03期
9 鲍立宁,洪桂云,黄显怀;电极生物膜脱氮工艺中反硝化菌相分析[J];安徽建筑工业学院学报(自然科学版);2004年05期
10 刘营;李玉保;;鲁西地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J];安徽农学通报;2008年19期
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1 窦瑞木;雷清泉;张改强;;番茄内生细菌TB-2生化特性及对番茄灰霉病菌的抑制作用[A];经济策论(上)[C];2011年
2 刘春;;鳢舒伯特气单胞菌内脏类结节病的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 马镝;;产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
4 黄华伟;王印庚;陈霞;张凤萍;;渡夏期养殖刺参腐皮综合征的发生与环境因子间的关系[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
5 邓露芳;王加启;姜艳美;卜登攀;魏宏阳;周凌云;王金枝;;产气法评价纳豆芽孢杆菌对瘤胃液体外发酵的影响[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
6 季红;吴正钧;陆孝义;;纤溶酶研究进展及以此为借鉴的乳源抗凝肽研究展望[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
7 邬纯鸿;黄毅;王文莉;钟代彬;吴广安;方艳军;;现代化奶牛场乳房炎病因调查及其防治[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
8 孙妍;王加启;奚晓琦;卜登攀;魏宏阳;周凌云;;产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌益生菌株的筛选及其生长特性研究[A];首届中国奶业大会论文集(上册)[C];2010年
9 余东游;刘韶娜;李卫芬;黄海智;;一株异养型亚硝酸盐转化菌的分离鉴定及特性研究[A];全国畜禽和水产养殖污染监测与控制治理技术交流研讨会论文集[C];2008年
10 胡治刚;胡江春;刘丽;汪思龙;苏振飞;王书锦;;海洋微生物复合制剂改善桉树人工林土壤质量研究[A];微生物实用技术生态环境应用学术研讨会论文集[C];2008年
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2 卢伟伸;海洋天然产物HKS及新型溴酚类凝血酶抑制剂的合成与构效关系研究[D];中国海洋大学;2010年
3 白方方;哈维氏弧菌VHH溶血素对牙鲆组织细胞的侵染作用及诱导细胞凋亡作用研究[D];中国海洋大学;2010年
4 李永芹;养殖鱼类病原菌检测芯片技术的建立[D];中国海洋大学;2010年
5 赵祺;冻土细菌新种和冰缘植物内生细菌新种的特征和多相分类学研究[D];兰州大学;2010年
6 朱兵峰;枯草杆菌两步法生产四甲基吡嗪的调控及机制的研究[D];江南大学;2010年
7 王大红;粘细菌Stigmatella WXNXJ-B产生新型抗肿瘤抗生素的研究[D];江南大学;2010年
8 肖仔君;Acetobacter sp. CCTCC M209061细胞催化潜手性酮不对称还原反应的研究[D];华南理工大学;2010年
9 张少平;豆豉纤溶酶定向进化及突变酶基因的表达研究[D];华南理工大学;2010年
10 赵景霞;纳米氧化锌对海马神经元电生理特性的影响及对PC12细胞生物学效应的机制研究[D];南开大学;2010年
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1 潘媛;不同油菜品种硼吸收利用差异与细胞壁组分关系的研究[D];华中农业大学;2010年
2 罗晶晶;斑点叉尾鮰生鱼片加工过程中的微生物变化[D];华中农业大学;2010年
3 郎晓磊;肠道菌对苏云金芽胞杆菌家蚕杀虫活性的作用[D];华中农业大学;2010年
4 逯晋忠;苏云金芽胞杆菌对云斑天牛的抗性研究[D];华中农业大学;2010年
5 张献芳;利用半夏凝集素构建内生工程菌及其抗同翅目害虫效果研究[D];华中农业大学;2010年
6 韩亚超;新型微生态制剂的研制[D];华中农业大学;2009年
7 袁玮;贵州省苗族腌酸汤中产乳酸菌素菌的筛选与初步研究[D];华中农业大学;2010年
8 贺中华;黄鳝肠道菌群的初步分析和益生菌的开发与应用研究[D];华中农业大学;2010年
9 孟小亮;黄颡鱼肠道益生菌的筛选及其应用研究[D];华中农业大学;2010年
10 田甜;鱼源嗜水气单胞菌的分离鉴定及耐药性研究[D];华中农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张志民,张靖华,余秀瑾;天麻钩藤饮治疗高血压病100例临床观察[J];中医药临床杂志;2005年05期
2 陆云华;张新;;豆豉纤溶酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];安徽农业科学;2007年23期
3 郑延斌,路福平,杜连祥;中国根霉12~#纤溶酶活力单位的测定[J];氨基酸和生物资源;2000年01期
4 丁贵平,蔡正森,王正刚;纳豆激酶的分离纯化及生化研究[J];氨基酸和生物资源;2001年03期
5 璩竹玲,刘赛,刘晨光,刘万顺;海洋假单胞菌碱性蛋白酶的纤溶及抗血栓形成作用[J];青岛大学医学院学报;2003年02期
6 张智清,姚立红,侯云德;含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用[J];病毒学报;1990年02期
7 宋关斌,李清漪;夏威环毛蚓纤溶酶的分离纯化及部分性质研究[J];动物学报;1996年02期
8 李峰,田宗城,赵东海,张建平,尹志华,姚开泰;pEGX-4T-2/NAP1融合蛋白的原核表达及鉴定[J];湖南文理学院学报(自然科学版);2005年02期
9 叶智彰,于力,涂光俦,冉永禄,阮长耿,陈重坤,程大卫,严菊英,陈悦书;浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒纤溶组份对凝血系统的作用[J];动物学研究;1981年01期
10 金家宝;醒脑静与脑活素治疗急性脑梗塞疗效比较—附96例报告[J];临床医学;1999年09期
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1 范晓丹;新型纤溶酶得产生菌选育、发酵优化及酶学性质研究[D];华南理工大学;2006年
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1 刘长振,李湘辉,隋森芳;TACO cDNA的克隆、表达及TACO的F肌动蛋白交联作用[J];中国生物化学与分子生物学报;2005年06期
2 郑兆鑫,贺沛富,严维耀,王启松,施文,赵洪兴,周智爱,朱慈晖,徐泉兴,陈嘉棣,李致勋,施履吉;编码口蹄疫病毒VP1免疫活性肽基因片段的化学合成及克隆与表达[J];病毒学报;1989年01期
3 邹民吉,王嘉玺,王利红,段聚宝,赵春文,蔡欣;肥胖基因的分离及其在大肠杆菌中的表达[J];生物化学与生物物理进展;2000年01期
4 褚明亮;陈创夫;刘君;曹旭东;;停乳链球菌MIG基因的克隆和原核表达[J];中国预防兽医学报;2008年06期
5 李本强;刘燕霏;徐军;杨建德;;猪胸膜肺炎放线杆菌整合膜蛋白基因的克隆与表达[J];黑龙江畜牧兽医;2010年07期
6 杨建德;刘燕霏;李本强;;马链球菌抗吞噬蛋白的鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;2010年17期
7 聂福平;李作生;邱薇;张富强;张连江;宋贵强;龙贵伟;廖金;任玉莹;余方芳;张泉鹏;王灵强;范泉水;;犬瘟热病毒Yunnan株H基因的克隆与表达[J];动物医学进展;2008年01期
8 郭伟生;吴哲;郭海勇;钱爱东;;抗菌肽的基因克隆表达及其在畜牧业中的应用前景[J];吉林畜牧兽医;2008年12期
9 莫小见,郭爱珍,陆承平;犬瘟热病毒南京株 H 蛋白基因的克隆与表达[J];中国病毒学;2004年05期
10 朱慧;王云霞;胡白石;刘凤权;;产酶溶杆菌OH11菌株α-水解蛋白酶基因的克隆与表达[J];中国生物防治;2007年04期
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1 程军;董辉;郭涛;韩红玉;姜连连;赵其平;朱顺海;马卫娇;曾艳波;孔春林;李婷;黄兵;;柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M_(20)的克隆与表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
2 姜媛媛;王景会;李玉秋;李达;杨贞耐;;微小毛霉凝乳酶基因的克隆与表达研究[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
3 曹威;栾颖;于波;;大鼠心肌细胞钙调磷酸酶Aβ基因的克隆与表达[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
4 宋鸿雁;严若峰;徐立新;宋小凯;李祥瑞;;堆型艾美耳球虫乳酸脱氢酶基因的克隆与表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
5 王建华;吴建平;费春红;杨联;张利平;;牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
6 孙玲;余少波;刘榜;;猪Nudt6基因克隆以及与眼肌面积性状相关SNP发现[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
7 戴佳琳;吴璇;黄江;杜武英;胡旭初;徐劲;余新炳;;亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
8 朱炎平;邱君志;关雄;;粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)几丁质酶基因克隆的研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
9 吕海鹏;史俊南;赵守亮;Athony J.Smith;;人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的表达、纯化和多克隆抗体的制备[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
10 王玮;杜艳;林国强;孙秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因联合P27基因克隆对K562细胞的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘越西 徐仁元 记者 金姝;世界首例赖氨酸转基因克隆奶牛在吉大农学部培育成功[N];吉林日报;2011年
2 记者 李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
3 黄勇娣;世界首例转基因克隆兔在沪诞生[N];解放日报;2007年
4 曹斌;血癌新病毒基因克隆成功[N];团结报;2000年
5 许沈华;什么是基因克隆[N];家庭医生报;2007年
6 王婷婷;我国完成世界首例转基因克隆兔实验[N];科技日报;2007年
7 王有佳;全球首例转基因克隆兔在沪诞生[N];人民日报;2007年
8 李建平;首例荧光转基因克隆猪所产猪崽再次被确认具有荧光特征[N];大众科技报;2008年
9 记者 王中宙;25只转基因克隆绵羊在内蒙古农业大学诞生[N];呼和浩特日报(汉);2010年
10 记者 钱海红;ITP 代谢基因克隆成功[N];健康报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吕凤霞;内生多粘芽孢杆菌纤溶酶的纯化、性质及其基因的克隆与表达[D];南京农业大学;2009年
2 刘怡辰;烷烃的微生物降解及其羟化酶基因的克隆与表达[D];南京农业大学;2010年
3 张振华;生防多粘芽孢杆菌SQR-21的定殖与诱导植物系统抗性研究[D];南京农业大学;2011年
4 姚正颖;Issatchenkia terricola XJ-2乙醛脱氢酶的纯化和性质及其基因的克隆与表达[D];南京农业大学;2011年
5 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
6 李惠华;龙眼体胚发生过程中激素代谢和信号转导相关基因的克隆与表达[D];福建农林大学;2010年
7 徐琪;鸭CD8α基因的克隆与表达调控初步分析[D];扬州大学;2012年
8 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
9 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
10 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李翔;茄子花青素生物合成关键基因的克隆与表达分析[D];上海交通大学;2011年
2 李荣荣;番木瓜果实成熟期若干基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
3 王友德;水稻纹枯病菌PG的分离纯化、理化性质及Rspg1基因的克隆与表达[D];扬州大学;2010年
4 唐璐敏;Arthrobacter nitroguajacolicus腈水解酶基因的克隆与表达[D];华东理工大学;2010年
5 孙柏;鸡Bcl10基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2010年
6 陈艳可;枯草芽孢杆菌Mrp系统基因的克隆与表达研究[D];武汉理工大学;2010年
7 杨丽;嗜麦芽寡养单胞菌D2株碱性磷酸酶基因的克隆与表达[D];青岛大学;2010年
8 蔡欣;人白细胞介素22的克隆表达及功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
9 徐丽娟;中国大鲵Dmrt2基因的克隆与表达[D];湖南农业大学;2010年
10 闫朝选;甘蓝型油菜玉米黄素环氧酶基因(BnZEP)的克隆与表达分析[D];四川农业大学;2010年
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