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新型GnRH疫苗的构建及免疫效力研究

张杏红  
【摘要】:促性腺激素释放激素(GnRH)是在下丘脑中合成的一个十肽激素,它能促进垂体促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的释放,进而调节性腺中类固醇类激素的生成及生殖细胞的发生。GnRH与载体蛋白或T细胞表位偶联后形成免疫原,免疫动物后刺激机体产生抗GnRH抗体,该抗体与内源性的GnRH结合使其失去生物活性,从而降低有生物活性的GnRH的水平,最终抑制动物的生殖能力。新型GnRH疫苗分子设计和高效佐剂的筛选是目前免疫去势的一个重要研究方向。本试验主要从下列四个方面展开研究: 1、GnRH疫苗佐剂筛选 本试验以通用型Th表位与4拷贝GnRH串联的化学合成肽(Th-4GnRH)为抗原,分别配以白油佐剂、氢氧化铝佐剂、弗氏佐剂以及CpG、NaF/CaCl2、咪喹莫特与白油或氢氧化铝配偶制成的复合佐剂,免疫3-4周龄雄性小鼠。通过检测血清中抗体水平、睾酮浓度、睾丸指数及睾丸组织学变化,来评价各组的免疫效力。结果表明,白油佐剂组抗体水平显著高于其它佐剂组,同时血清睾酮浓度及睾丸指数显著低于其它佐剂组(P0.05);咪喹莫特与氢氧化铝组合使用与单独的氢氧化铝组相比小鼠血清抗体的峰值更高、睾酮浓度及睾丸指数更低,有效增强了免疫反应;而CpG、NaF/CaCl2、咪喹莫特与白油组合使用时,与单独的白油组相比免疫效力没有增强;各试验组小鼠的睾丸发育受到了明显的抑制,表现为曲细精管上皮萎缩,各级生精细胞层次不清,管腔内无精子生成或精子数量很少。 2、GnRH疫苗分子的原核表达、纯化与鉴定 将人工合成的通用型Th表位与4拷贝GnRH的串联基因(Th-4GnRH),插入到原核表达载体pET32a(+),构建得到重组质粒pET-Th-4GnRH转化大肠杆菌BL2],用IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western-blot分析,证实获得了分子量约为27kDa的目的蛋白;且通过镍亲和层析纯化得到条带单一的电泳纯蛋白。 3、GnRH疫苗分子真核表达质粒的构建及其体外鉴定 用PCR方法扩增Th-4GnRH基因片段,然后插入pVAX1载体,构建得到pVAX-Th-4GnRH重组质粒,转染Vero细胞进行瞬时表达,利用间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。结果表明,转染了pVAX-Th-4GnRH重组质粒的Vero细胞间接免疫荧光染色显示出特异性绿色荧光,而转染pVAX1空载体的细胞则没有特异性的荧光,说明目的分子在Vero细胞中正确表达,为GnRH DNA疫苗的进一步研究打下基础。 4、新型GnRH疫苗免疫原性研究 分别将上述大肠杆菌表达的Th-4GnRH融合蛋白的纯化物及其包涵体形式和构建的真核表达质粒免疫3-4周龄雄性小鼠,并采用DNA初免-蛋白质加强免疫策略增强DNA疫苗的免疫效果。通过检测血清抗体水平、睾酮浓度、睾丸指数及睾丸的组织形态学变化来评价免疫效力。结果表明,Th-4GnRH融合蛋白的纯化物及其包涵体形式都能很好的诱导GnRH抗体的产生,而且包涵体形式诱导产生抗体的速度要快于蛋白纯化物;DNA初免-蛋白质加强免疫能显著增强DNA疫苗的免疫效果,使蛋白质加强免疫后血清抗体迅速上升;包涵体、纯化蛋白免疫两次及DNA初免-蛋白质加强免疫的小鼠血清睾酮浓度、睾丸指数都显蓍低于对照组(P0.05),睾丸组织形态学检测发现上述三个组小鼠的睾丸曲细精管生精上皮萎缩、各级生精细胞层次不分明,管腔内精子很少或无精子,表明睾丸发育和精子发生受到明显抑制。


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1 方富贵,章孝荣;GnRH免疫及其在动物生产中的应用[J];动物科学与动物医学;1999年04期
2 方富贵;GnRH免疫对公、母猪生产的影响[J];黑龙江动物繁殖;2001年01期
3 王超,雍长福;促性腺素释放激素(GnRH)的作用机制[J];宁夏农学院学报;2002年03期
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9 金元昌;陈春岚;苏晓艳;李会东;令玉林;李景鹏;;GST-GnRH/TRS融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究[J];西北农业学报;2006年04期
10 汪琳仙,李莹辉,王海滨;GnRH促鸡卵泡颗粒细胞孕酮合成功能作用机制的研究[J];畜牧兽医学报;1999年03期
11 吴结革,茆达干;GnRH及其类似物在动物繁殖中的应用[J];南京农专学报;2000年03期
12 费维真,马德慧,贾东平,赵俊杰,郭景玥,王建强;GnRH免疫去势对公鸡生长发育的研究[J];动物科学与动物医学;2003年11期
13 赵畅;汪琳仙;;鸡促性腺激素释放激素对卵泡膜分泌雌二醇的影响[J];中国农业大学学报;1993年02期
14 韩志强;张洪涛;孙晓玉;刘光前;乔丽霞;梁坤;;CIDR与GNRH诱导同期发情效果比较[J];中国乳业;2009年10期
15 方永强,黄威权,陈蕾,张金山;GnRH在文昌鱼脑和哈氏窝的分布[J];动物学报;1999年01期
16 王根林,陈杰,陈伟华,韩兆玉;大豆黄酮对青年母猪GnRH,LH和抑制素分泌的影响(英文)[J];江苏农业学报;1999年01期
17 何孔泉,陈伟华,张汤杰,陈杰;泌乳二花脸猪和大白猪下丘脑-垂体-性腺轴功能的比较研究[J];中国农业科学;2000年03期
18 韩志强;乔丽霞;张洪涛;孙晓玉;刘光前;梁坤;;CIDR与GnRH诱导同期发情效果比较[J];中国牛业科学;2010年01期
19 韩志强;乔丽霞;张洪涛;孙晓玉;刘光前;梁坤;;CIDR与GnRH诱导同期发情效果比较[J];中国奶牛;2010年05期
20 夏国良,张少英,张才乔,杨传任;牛垂体细胞体外培养条件下催乳素分泌的调节—TRH、 GnRH、LH和PRL的影响[J];畜牧兽医学报;1991年04期
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1 ;The Existence of Gonadotropin-Releasing Hormone(GnRH) Immunoreactivity in the Brain of Horseshoe Crab,Tachypleus tridentatus[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
2 张朝晖;崔毓桂;仲远明;王茵萍;王雪松;丁贵鹏;居小斌;;低频电针对大鼠性发育前后下丘脑GnRH释放效应的实验观察[A];2011中国针灸学会年会论文集(摘要)[C];2011年
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4 艾星子·艾里;胡文静;杨新华;丁岩;季菲;;腹腔镜卵巢子宫内膜异位囊肿手术联合GnRH治疗对卵巢储备功能影响[A];中华医学会第三次全国绝经学术会议暨绝经相关问题学习班论文汇编[C];2011年
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6 苏娟;雷治海;张文龙;姚远;李珣;刘延鹏;刘晶;蔻芮;;Orexin B在下丘脑的分布及其与GnRH和OB-Rb的关系[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
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8 ;The Existence of Gonadotropin-Releasing Hormone(GnRH) Immunoreactivity in the Central Nervous System and Gonad of the Swimming Crab,Portunus trituberculatus[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
9 程军平;周宁;迟晓丽;王涛;周文霞;刘克良;张永祥;;新型GnRH拮抗剂的筛选与评价[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年
10 冯碧云;黄辉洋;叶海辉;尚丽丽;李少菁;;GnRH受体在拟穴青蟹神经器官中的免疫识别[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
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1 张杏红;新型GnRH疫苗的构建及免疫效力研究[D];南京农业大学;2009年
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3 丁海珍;雌激素对青春期前雌性大鼠下丘脑GnRH表达和分泌的影响[D];南京医科大学;2010年
4 胡文静;腹腔镜卵巢子宫内膜异位囊肿手术联合GnRH治疗对卵巢储备功能影响[D];新疆医科大学;2012年
5 相元翠;GnRH拮抗剂和雌激素联合应用预防顺铂所致小鼠卵巢损害的实验研究[D];郑州大学;2011年
6 王承志;中华绒螯蟹脑组织促性腺释放激素类似物分离、免疫定位及功能鉴定[D];上海海洋大学;2012年
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1 博乐市畜牧兽医站 成书伟 袁德军;动物防疫技术要点简介[N];博尔塔拉报;2008年
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4 惠恩举 单风联;鸡免疫失败的原因[N];中国畜牧兽医报;2005年
5 山东省章丘市畜牧局 马玉胜;养鸡免疫应注意哪些问题[N];河北科技报;2006年
6 兴业证券 王晞;金宇集团 动物疫苗:被忽视的金矿[N];证券时报;2006年
7 上海恒丰强动物药业有限公司技术部 王华听 段凤灵 宋红军;多维的临床应用——猪[N];中国畜牧兽医报;2008年
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