收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)生产工艺探索

朱晓玮  
【摘要】:滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)可以感染鸡和火鸡引起急性或慢性传染病,主要侵害滑液囊和腱鞘,造成关节肿大,引起渗出性滑膜炎、粘液囊炎或腱鞘滑膜炎。该病发展缓慢、病程长,笼养鸡不易被发现,且一旦发病,极难根除;还易发生混合感染,加剧病情,增高死亡率,经常给养鸡生产造成难于弥补的损失。国外已开发出商品化的滑液囊支原体活疫苗和油佐剂灭活疫苗的研究报告。为此,针对我国鸡群滑液囊支原体感染现状,进行了滑液囊支原体灭活疫苗的研制。本实验是在完成鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)实验室研究的基础上,开展的该疫苗生产工艺研究工作。本实验分别从培养基优化、发酵工艺、浓缩条件和灭活工艺研究四个方面开展研究,结果如下:1对改良MS培养基、改良Frey氏培养基、KM2培养基和改良KM2培养基四种培养基的理化指标和培养性能进行对比,将菌种复壮培养1代后,分别接种改良MS培养基、改良Frey氏培养基、KM2培养基和改良KM2培养基进行CCU测定。旨在选取一种制备简便、性价比高、增菌效果好的培养基。结果显示,改良MS培养基在灭菌前后的pH值变化较小、较稳定;接种菌种后,改良MS培养基的活菌浓度达到108-9CCU/ml,增菌效果较好。而且成本低、配制方便,可选为鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)的生产用培养基。2将鸡滑液囊支原体(HN01株)冻干菌种以改良MS液体培养基进行复苏,分别按2%、5%、10%、15%、20%的量接种至改良MS液体培养基中,以纯粹检验和CCU测定结果筛选最适接种量;用5L发酵罐,将溶氧分别自动调节为10%,20%,40%,80%,以纯粹检验和CCU测定结果筛选最适溶氧控制量;将种子接种至5L发酵罐,分别培养12h、16h、20h、24h、28h、32h,无菌取培养菌液,记录取样时的pH并对其进行纯粹检验和CCU测定,研究其最适发酵罐培养曲线;通过在稳定生长期培养过程中以不同次数分别添加总体积的0.1%、0.2%、0.5%的1%精氨酸作为补液继续培养,研究培养过程中补液最适比和补液最适次数,为大规模生产提供培养参数。实验表明,采取接种量为10%,80r/min搅拌转速并间隙通气,控制溶氧在20%左右;采取连续增菌培养工艺,可使鸡滑液囊支原体生长繁殖稳定期延长13~19h,经过发酵罐培养工艺优化,可使鸡滑液囊支原体(HN01株)的培养活菌数达到109.0CCU/ml左右。3将生产的鸡滑液囊支原体(HN01株)菌液分别经截留分子量为100 K孔径的卷式超滤膜10倍超滤浓缩和16000r/min连续离心机10倍离心浓缩,对两种浓缩方法收获的菌液进行灭活后制备疫苗,通过对疫苗的理化性状、安全性和效力检验等的检测结果衡量两种浓缩方法的可行性。经检验,超滤浓缩方法和连续离心沉降方法浓缩的抗原经灭活后制备的鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)均安全、有效,物理性状均一稳定,无显著差异,均适用于疫苗生产企业规模化生产应用。4将鸡滑液囊支原体(HN01株)的抗原原液和抗原浓缩液分别置于无菌容器内,每种抗原分三组,分别按0.1%、0.3%、0.5%的量加入10%的甲醛溶液(用灭菌生理盐水配制成),充分混合后置37℃下灭活,分别于12小时、16小时、20小时、24小时、30小时、36小时逐瓶取样,进行灭活检验。实验结果表明,鸡滑液囊支原体(HN01株)抗原浓缩液用浓度为0.3%的甲醛溶液,37℃作用16小时方可灭活完全。为了确定能彻底灭活抗原,将鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)灭活工艺设定为:按菌液总量的0.3%加入甲醛溶液,置37℃灭活24小时,每隔2小时充分震摇或搅拌一次。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘新妍;;鸡滑液囊支原体发病特点及治疗措施[J];畜牧兽医科学(电子版);2019年09期
2 马爽;于国营;范根成;郭莉莉;赵鹏;宫晓;宋新宇;;五株鸡滑液囊支原体的分离与鉴定[J];湖北农业科学;2018年14期
3 尹久东;董俊英;蔡晓红;虢晓霞;;鸡滑液囊支原体的发病特点及诊断治疗措施[J];吉林畜牧兽医;2019年08期
4 赵君和;;滑液囊支原体是如何感染鸡群的[J];北方牧业;2018年07期
5 吕玲;;滑液囊支原体可体外入侵非噬菌性鸡细胞[J];中国家禽;2009年07期
6 任景乐;吕良鹏;郝海玉;祝贵华;阮国宏;;一起蛋鸡滑液囊支原体病的诊疗、跟踪监测及体会[J];山东畜牧兽医;2019年05期
7 季焕晨;;一例蛋禽滑液囊支原体的诊疗[J];畜牧兽医科技信息;2018年09期
8 丁美娟;卢凤英;严鹏;尹秀凤;张小飞;;鸡滑液囊支原体不同地区分离株对常用抗菌药物的敏感性试验[J];中国兽药杂志;2015年10期
9 王素伟;;鸡滑液囊支原体的防控措施[J];家禽科学;2018年03期
10 李桂喜;周勇岐;卢卫东;孙进忠;卢卫东;白朝勇;;一株鸡滑液囊支原体的分离与鉴定[J];兽医导刊;2012年01期
11 郭建华,陈德威,霍乃蕊,廉慧锋,陈伟;鸡滑液囊支原体的分离与鉴定[J];中国家禽;1998年06期
12 付浩;赵冬凤;;一例青年蛋鸡场感染滑液囊支原体的病例分析[J];中国动物保健;2019年04期
13 王素伟;;鸡滑液囊支原体防控措施[J];中国畜禽种业;2018年03期
14 石晓磊;齐田苗;边海霞;周云锋;;宁夏地区鸡滑液囊支原体的分离鉴定与药敏试验[J];动物医学进展;2018年11期
15 曹中赞;栾新红;刘胜旺;何剑斌;;禽滑液囊支原体研究进展[J];动物医学进展;2012年11期
16 丁美娟;张小飞;尹秀凤;薛家宾;黄显明;刘青涛;周勇岐;杨莉莉;朱燕锋;;鸡滑液囊支原体的分离和鉴定研究[J];中国家禽;2011年24期
17 郭朋辉;郭亚男;徐婧祎;姜肖军;刘双;何生虎;;鸡滑液囊支原体的分离鉴定及病理组织学观察[J];动物医学进展;2020年02期
18 田亚琴;文玉康;王豪举;丁红雷;;鸡滑液囊支原体疫苗研究进展[J];中国家禽;2020年09期
19 郭亚男;郭朋辉;司朵朵;郭磊;何生虎;;某蛋鸡养殖场鸡滑液囊支原体的分离鉴定及跗关节病理组织学观察[J];动物医学进展;2020年04期
20 丁美娟;周永银;张懿;张丹;周勇岐;尹秀凤;张小飞;;鸡感染滑液囊支原体的病理学观察[J];畜牧与兽医;2020年12期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 招丽婵;覃健萍;王占新;林欣;鲁俊鹏;;近年来不同地区鸡滑液囊支原体分离株药物敏感性分析[A];中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集[C];2018年
2 周锦龙;封柯宇;吴波良;陈峰;毕英佐;谢青梅;;禽滑液囊支原体液体培养中pH与活菌浓度关系研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会论文集[C];2014年
3 张济培;陈建红;;鸡毒支形体和鸡滑液囊支形体PCR诊断方法的建立与应用[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年
4 丁美娟;张小飞;卢凤英;严鹏;尹秀风;张海涛;薛家宾;;江苏部分地区鸡滑液囊支原体感染的血清学调查[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2015年
5 张秀美;;PCR技术在禽支原体诊断上的发展和应用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
6 陈钢;陆祖军;武波;;费氏中华根瘤菌HN01与脯氨酸代谢有关的lrp基因的克隆[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
7 唐美琼;许兢;武波;;费氏中华根瘤菌HN01中putA基因的研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前12条
1 朱晓玮;鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)生产工艺探索[D];南京农业大学;2018年
2 丁美娟;鸡滑液囊支原体的分离鉴定及部分生物学特性研究[D];南京农业大学;2013年
3 吴倩倩;滑液囊支原体分子流行病学调查分析及新型等温检测方法的建立[D];南阳师范学院;2020年
4 韩雪娇;某蛋种鸡场鸡滑液囊支原体传播规律及感染来源的研究[D];西北农林科技大学;2015年
5 温政;鸡滑液囊支原体LP78蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[D];山东农业大学;2018年
6 王昆;禽滑液囊支原体灭活疫苗的初步研究[D];甘肃农业大学;2018年
7 寇艳利;滑液囊支原体环介导等温扩增技术检测方法的建立与初步应用[D];西北农林科技大学;2018年
8 石晓磊;鸡滑液囊支原体的分离鉴定及其活疫苗免疫效果的评价[D];西北农林科技大学;2018年
9 李浩然;滑液囊支原体NADH氧化酶酶学活性及粘附特性研究[D];安徽农业大学;2020年
10 梁善范;接种根瘤菌HN01及其突变株GXHN100对大豆根系结瘤及微生物生态的影响[D];广西大学;2007年
11 艾文婷;某蛋种鸡场滑液囊支原体感染原因的分析[D];西北农林科技大学;2016年
12 曹永强;费氏中华根瘤菌HN01与硫代谢相关基因smrA、smrB和smrC的研究[D];广西大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 记者 戚尔达;提案方倾囊支招 办理方开诚布公[N];联合时报;2021年
2 沙河市畜牧水产局动物医院 李少江;雏鸡新城疫与滑液囊支原体混感的诊治[N];河北科技报;2015年
3 沙河市畜牧水产局动物医院 李少江;一例雏鸡新城疫与滑液囊支原体混感的诊治[N];河北农民报;2015年
4 张泓李琳;众智囊支招“泰达升级版”[N];北方经济时报;2008年
5 沙河市蝉房乡兽医站 曹会民;鸡滑液囊支原体病的诊治[N];河北科技报;2020年
6 孙桂芹;鸡滑膜炎的危害及防控措施[N];河北科技报;2015年
7 记者 于菲;老人别忘补滑液[N];医药养生保健报;2010年
8 沙河市动物医院 李芳芳 董起昉;一例鸡滑液囊支原体病的诊治[N];河北科技报;2019年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978