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《南京农业大学》 2000年
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梨火疫病菌的风险分析及检测技术研究

胡白石  
【摘要】: 本论文主要进行了梨火疫病菌的风险分析、国内部分蔷薇科植物对梨火疫 病的感病性及梨火疫病菌的检测技术研究。 一、梨火疫病菌的风险分析 参照国际植物检疫措施标准,结合我国实际情况,分别构建了以传播途径 和以有害生物为起点的有害生物风险分析(PRA)体系;对构建的风险体系进 行了验证。利用构建的风险分析体系对梨火疫病菌进行了风险分析。 构建的风险分析体系分为4个阶段:风险分析的起动、风险评估、风险管 理和风险交流。 以传播途径为起点的PRA注意到了进境物本身的风险。首次应用生物安全 评估的通用公式R=f(S,P),对携带的有害生物进行风险评估。将通用公式 简化为R=SXP,较客观地解决了有害生物风险(R)与各风险相关因子之间的 运算关系。根据R值,将有害生物划分为低度风险、中度风险、高度风险和特 高风险4个风险级别,建议对中度以上风险的有害生物采取检疫措施。 以有害生物为起点的PAR,除起动阶段不同外,其余阶段与以传播途径为 起点的PRA基本相同。 利用已经发表的有害生物风险相关数据,对构建的风险分析体系进行了初 步验证,证明了该风险分析体系的可行性。 利用构建的风险分析体系,在收集资料和试验的基础上,对梨火疫病菌进 入我国的风险进行了分析,运算得出R=10.108,属于特高风险有害生物。提 出了相应的风险管理措施。 二、国内部分蔷薇科植物的感病性及供试菌株致病力的初步研究 利用从全国各地收集的蔷薇科9属、18种植物的幼苗、花序、一年生嫩枝、 及幼果,利用梨火疫病菌的3个供试菌株,对幼苗、花器、嫩枝和幼果的感病 性进行了研究。结果表明梨的感病性高于苹果;白梨、西洋梨和杜梨的感病性 高于沙梨品种;其他蔷薇科植物感病性低于梨和苹果;花器和幼果的感病性高 于枝条和幼苗;所有供试活体接种的梨品种均感梨火疫病;花序离体接种的所 有供试梨和苹果属植物(品种)均感梨火疫病。梨幼果接种表明,幼果的感病 性与花序和植株的感病性有相关性。评价梨品种感病性最佳的方法是幼苗的活 体接种;花序接种、梨幼果碟片接种法结果与梨幼果半果法一致。碟片接种法 便于统计和节省材料而优于半果接种法。接种结果显示:0056和Ea菌株的致 病力相当,明显高于0036菌株。0056菌株活体接种表明,供试梨和苹果品种 的感病性由高至低的次序为:杜梨、象牙白、酥梨、鸭梨、早酥、巴梨、茄梨、 爱宕、金20世纪、新兴、丰水、和伏翠(苹果)。 收集的国内部分蔷薇科植物感病性试验表明,国内广泛存在梨火疫病的寄 主,尤其以梨最为感病。我国广泛种植的富士、嘎拉等主栽品种高感梨火疫病, 其他蔷薇科植物也不同程度地感梨火疫病。由于很多蔷薇科植物是公园绿化的 主要树种,因此梨火疫病对我国梨和苹果生产及环境美化有极大的潜在风险。 三、梨火疫病菌的检测技术研究 卜 利用梨火疫病菌的Ea、0056和0036菌株不同处理的全菌体及提取的3个 菌体组分作为免疫原:脂多糖(LPS人 2种胞外多糖(EPSI和 EPSZ* 常规 免疫家兔,获得8种抗血清。利用玻片凝集反应、琼脂双扩散(ODD)和ELISA 法测定了抗血清的效价和专化性;利用膜吸附法测定了各种抗血清的吸附目标 菌的能力。结果表明: 全菌体、胞外多糖和脂多糖作为免疫原,均可获得高效价的抗血清;不同 的免疫原制备的抗血清专化性有差异。由 LPS、EP SI和 EPSZ制备的抗血清 (ASL、ASSI和ASSZ)以及由戊H醛固定全菌体抗原制备的抗血清(AS EaEa、 AS56和 AS36)专化性相当;其次是热固定全菌体制备的抗血清(ASEaR);专 化性最差的是活菌体制备的抗血清(ASEaH )o 比较了3种血清学检测方法的灵敏度和专化性,灵敏度由高至低为: ELISA、玻片凝集反应和ODD;专化性由高至低为:ODD、ELISA和玻片凝 集反应。膜吸附效率比较发现,AsL的吸附效率最高。 由活菌体为免疫原制备的抗血清适宜于鉴定细菌间的血清学关系;所有方 法制备的抗血清均适用于ODD;除活菌体为免疫原制备的抗血清外,其余抗 血清均适用于玻片凝集反应和ELISA反应。由LPS制备的抗血清最适宜用于 免疫分离。 2.利用Tns转座子诱变梨火疫病菌0056菌株。以野生型菌的抗血清(As56), 用玻片凝集法测定了!000个结合子,ODD法随机测定了50个结合子,均与 野生型菌株的抗血清发生了明显的血清学反应,证明利用多抗血清检测梨火疫 病菌,因细菌发生突变而漏检的几率很小。 3.在国内首次利用LB、NSA和MMZCll培养基,结合血清学技术,对在隔离 温室中人工接种发病的梨枝条进行了分离和鉴定。试验表明MMZCU培养基对 梨火疫病菌的鉴定作用优于NSA培养基。该方法可直接分离并同时鉴定梨火 疫病菌。 4.首次利用梨火疫病菌的抗血清,单面包被混合纤维素滤膜,结合选择性培 养基,建立了膜上免疫分离新技术,对梨火疫病菌接种样品进行了选择性分离, 灵敏度达sxlo‘cfu/ml。利用该方法从稻种上选择分离白叶枯和条斑病菌获得了 成功。 5.利用 AS56、
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S436.612;S432.4

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【引证文献】
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