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《南京农业大学》 2000年
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远缘杂交法结合RAPD技术对鲢、团头鲂遗传图谱的构建

林红  
【摘要】: 1.互为测交的远缘杂交法与RAPD扩增结合获得作图群体及遗传标记 作为基因组图谱研究的基础,遗传图谱在鱼类遗传育种中具有重要的作 用,针对我国养殖鱼类世代间隔时间长,鱼类基因克隆工作相对落后,已克 隆和测序的鱼类基因及分子标记数量极少的现状,在哺乳动物单精子PCR 分型技术理论的基础上,本研究在国内首次通过鲢和团头鲂的远缘杂交获得 作图群体的设想。以100个10碱基随机引物扩增两远缘杂交亲本鲢 (Hypophthalmichthys molitrix)、团头鲂(Megalobrama amblycephala)及 其杂交后代的基因组DNA。有58个引物的扩增产物在雌、雄两杂交亲本间 表现出多态性,多态频率为59.1%;杂交后代中所有扩增条带均来自父本或 母本;在所有产生分离的56个RAPD标记中,54个标记经X~2检验表明符 合孟德尔分离规律性,偏分离率仅占3.6%。表明以远缘杂交法得到的杂交 子代适合作为遗传作图群体。通过互为测交的远缘杂交法,利用RAPD标 记进行快速鱼类遗传作图是可行的。 2.以互为测交的远缘杂交后代为作图群体,分离的RAPD片段为遗传 标记,绘制鲢、团头鲂遗传连锁图谱 在两个远缘的杂交亲本间,那些在一个亲本呈杂合状态而在另一个亲本 中表现为缺失的标记将在F1代中按1∶1的比率分离(两亲本间均为杂合的 标记则呈3∶1分离)。各亲本的染色体减数分裂状况通过RAPD标记的变化 就可以直接体现出来。经过对100个引物的筛选,共得到了由28个引物扩 增而来的50个RAPD标记。在LOD≥3.0,θ≤0.38的条件下将其分群, 结果雌性亲本鲢(352.9cM)的5个连锁群上分布有18个标记,而雄性亲 本团头鲂(282.5cM)则有14个RAPD标记被定位在4个连锁群上。在似 然率≥1000∶1的条件下确定的框架图距分别占各自基因组估计长度的54.1% 和45.8%。远缘杂交结合RAPD标记的作图策略不仅可用于鱼类的遗传图谱 构建,而且在理论上适合任何杂交可育的杂合亲本的图谱研究。它可以在不 需预先得到作图对象的详细遗传背景的情况下,进行快速作图。本图谱构建 的成功,为鲢、团头妨染色体上与重要经济性状有关的基因的定位提供了框 架结构,为今后其他鱼类的遗传囹谱构建工作提供了理论和实践基础。 3.鱼类RAPD反应如的优化 对鲢和团头妨基因组DNA的RAPD扩增反应中的模板浓度、引物浓度、 镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析。并在此基础上建立了适 于本实验室 RAPD研究的最佳反应体系:25ul反应体系中,含 10InM TriS.HCI (pHS刀),10mM KCI,SInM p)。SO4,ZInM MgCI。,0.05%N’P-40,0.ZInM dNTP,20fig引物,20fig模板,1.SU Taq DNA聚合酶。热循环参数为:95 oC预变性3分钟,然后94 ’C变性1分钟,36’C退火1分钟,72C延伸2分 钟,共 40个循环,最后 72 ’C延伸 6分钟。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S965.113;S965.119

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【引证文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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5 本报记者 王璐 中国科学院院士、中国农业科学院作物科学研究所研究员 庄巧生;梦里麦田是金黄[N];经济日报;2009年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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