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链格孢菌毒素及其对紫茎泽兰的致病机理

万佐玺  
【摘要】: 链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.)Keissler)是紫茎泽兰 (Eupatoriun adenophorum Spreng.)的自然致病菌,其致病的主要因素 是其毒素的作用,本文对其产毒能力、产毒培养条件、毒素提纯、毒素 作用范围及致病机制进行了较为全面的研究。 通过对种子萌发抑制法、幼苗浸渍法、叶圆片法、针刺法等毒素生 测方法的比较分析,确定针刺法为链格孢菌毒素的主要生测方法;并以 针刺法对501、503、402、LS、YN、AW等6个菌株的产毒能力进行比 较,筛选出501菌株产毒能力最强。 从供试的4种固体培养基(小麦、玉米、大豆、大米等)分析,小 麦培养基最利于501菌株产毒,其最佳含水量为40%左右;从供试的3 种液体培养基(PSK、SCSC、紫茎泽兰叶汁培养基)分析,产毒差异不 显著。考虑到培养基的制备、无菌滤液的生测、毒素的提纯等工作的方 便,确定PSK为产毒培养的最佳培养基。研究表明,液体培养时间为 5-7天,pH值为4.13、温度为25℃、静置、黑暗等条件有利于毒素的产 生。 501菌株产生的致病毒素比较稳定,pH、温度、贮存时间对毒素的 活性没有明显的影响;501菌株产生的毒素具有一定的选择作用特性, 苦苣菜、鸭跖草、火柴头、刺槐、水花生和红花酢浆草等敏感性较高, 可作为毒素提纯和评价的生测材料。 通过萃取、硅胶柱层析、薄层分离等方法,提纯得到了501菌株产 生的对紫茎泽兰有致病作用的毒素,其紫外最大吸收峰在 296nm,Rf=0.34。毒素的活性很高,1μg/g的毒素水溶液即可引起紫茎泽 兰叶片典型的病斑,5μg/g的毒素水溶液浸渍处理培育2个月的紫茎泽 兰幼苗根部,12h即可使幼苗茎萎缩,叶片萎蔫。 致病毒素对紫茎泽兰离体叶片细胞膜的透性有明显的影响,引起 K~+、Na~+严重渗漏,叶片组织的MDA含量上升;致病毒素使紫茎泽兰离 体叶片CAT、POD、APX等保护酶的活性下降,最终导致紫茎泽兰叶片 感病。 通过对链格孢菌毒素的研究,证实链格孢菌使紫茎泽兰叶片致病的 机理与致病毒素关系密切,为开发501菌株的菌丝体作为防除紫茎泽兰 — — 的莫蓖戳享剂慑侯了可@的羹讼依沼,亦为开发扛羹登作为生物回化学 除享赐捉侯了曹回瞩欠奎回.
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