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《南京农业大学》 2000年
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猪β_2肾上腺素能受体基因的扩增、克隆与表达

陈勇  
【摘要】: 本研究根据猪β_2-肾上腺素能受体(β_2-adrenergic receptor,β_2-AR)cDNA 序列设计了1对引物,以大大二杂种猪肝脏基因组DNA为模板,经多聚酶链 式反应(PCR)获取了一约1.3kb目的基因片段。将该片段克隆入pMD18-T 载体,构建猪β_2-AR基因重组质粒pMDAR。 经测序后比较,本试验克隆的β_2-AR基因与GenBank收录的序列有四处 不同,但两者有99.84%的碱基序列相同,编码的氨基酸有99.52%相同。计算 机分析表明,β_2-AR共有4个明显的亲水区域,有2个暴露于细胞膜外。在 β_2-AR四个胞外区中,抗原决定簇主要集中在第一和第三胞外区内。 pMDAR在β_2-AR基因5'端外侧含有2个EcoRⅠ酶切位点。用EcoRⅠ 酶切消化和T4 DNA连接酶连接后,获得了具有单一EcoRⅠ酶切位点的重组 质粒pMDAR/E。 从pMDAR/E中切下β_2-AR基因编码区,与表达载体pET-32C中硫氧还 蛋白基因3'端融合,构建β_2-AR原核表达重组质粒pET-32CAR。经PCR检 测、多酶切鉴定和部分序列分析证实β_2-AR表达重组质粒构建成功,阅读框 架无误。 将pET-32CAR转化大肠杆菌BL21(DE3)。以1mM IPTG诱导,分别在 诱导0、1、2、3、4h后取样,菌体经细胞膜蛋白提取后,发现β_2-AR以融合 蛋白的形式在大肠杆菌获得表达,并位于细胞膜上。薄层扫描结果表明,融合 蛋白在诱导后3h~4h左右表达量达到峰值。不同IPTG终点浓度(0.05、0.1、 0.5、1mM)对融合蛋白的表达量无显著影响。与其它浓度相比,1mM IPTG 诱导产生的融合蛋白略高,约占细胞膜总蛋白的10.2%。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S852

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 吕宝璋;β3-肾上腺素能受体研究的进展[J];国外医学(分子生物学分册);1996年02期
2 卢新政;β肾上腺素能受体的基因结构[J];国外医学(分子生物学分册);1997年02期
3 李明远;王道若;;抗独特型抗体与生物受体[J];国外医学(免疫学分册);1988年05期
4 吕志良,张惟杰;β肾上腺素受体的结构与功能域[J];生物化学与生物物理进展;1992年06期
5 王岩,郭津,黄建英,张镜宇,苏学良;抗TSH独特型抗体的制备及免疫学特性的研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;1996年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6 毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
7 单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期
8 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
9 王北艳;曹宁;汤晖;;苜蓿中华根瘤菌电转条件的优化[J];安徽农学通报;2008年11期
10 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4 商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
5 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
6 罗余生;廖玉华;王敏;魏宇淼;董继华;王金萍;卢银平;;AT1-受体多肽诱导大鼠免疫反应及其药物干预的研究[A];江西省第三次中西医结合心血管学术交流会论文集[C];2006年
7 王革;王妍;何凌冰;乔刚;朱一松;王君艳;;酵母分泌表达重组人神经生长因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
8 任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
9 马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
10 马勋;陆承平;;猪戊型肝炎病毒新疆分离株全基因序列的分析[A];中国科协2005年学术年会“新疆现代农业论坛”论文专集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
2 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
3 赵生财;反刍兽平衡麻醉复合制剂——MP合剂的研究[D];东北农业大学;2000年
4 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
5 崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
6 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
7 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
8 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
9 叶纨芝;白菜细胞核雄性不育相关基因mf-CYP450的分子鉴定、克隆和序列分析[D];浙江大学;2001年
10 吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 焦健;食品中潜在环境内分泌干扰物的受体通道研究[D];河南工业大学;2010年
2 陈小平;主动免疫重组绵羊β_2-肾上腺素受体对大鼠生长及血清生化指标的影响[D];新疆农业大学;2010年
3 管晓娟;柄袋沙蠋不同发育期乙酰胆碱和五羟色胺的免疫组化定位[D];鲁东大学;2011年
4 韩冰;阿勒泰绵羊脂肪及肌肉组织中肾上腺素能受体mRNA水平的发育性变化规律研究[D];新疆农业大学;2011年
5 刘波;稻蝗及其近缘属部分种RAPD多态性及中华稻蝗种群遗传多态性研究[D];陕西师范大学;2000年
6 郭巍;苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因克隆及表达的研究[D];东北农业大学;2000年
7 刘怀然;鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
8 赫英俊;DNA分子标记技术在海带种质鉴定中的应用[D];中国科学院海洋研究所;2000年
9 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
10 杜德伟;乙型肝炎病毒DNA免疫的实验研究[D];第四军医大学;2000年
【二级参考文献】
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1 贾文祥;赵宗容;蔡美英;牟家琬;王道若;刘文方;余蓉;伍翰然;雷幼导;陈正鹏;;抗个体型抗体对HBV感染的免疫调节作用——抗-HBs的抗个体型抗体的制备和鉴定[J];中国免疫学杂志;1986年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ThomasJ.Doherty;徐士新;;α2肾上腺素能受体的生理作用[J];中国兽药杂志;1989年01期
2 徐士新;;α_2肾上腺素能受体药理学[J];中国兽药杂志;1991年04期
3 梁春宇;高建邦;张培因;段志雄;潘日润;;大鼠输尿管中α_1肾上腺素能受体亚型的分布特征[J];中国兽医学报;2010年06期
4 陈刚,周光宏,刘清;肾上腺素能受体及其调控的研究进展[J];畜牧与兽医;1998年01期
5 王根旺;;新斯的明对家兔离体小肠纵行平滑肌收缩性的影响[J];陇东学院学报(自然科学版);2004年02期
6 霍书英;马爱进;武现军;李玉荣;;成年大鼠睾丸去精索上神经对睾丸功能及肾上腺素能受体表达的影响[J];中国畜牧兽医;2011年02期
7 郭红阳;王玉堂;单兆亮;时向民;刘建国;;应激山羊心肌交感神经信号细胞传导过程及干预研究[J];心脏杂志;2011年03期
8 李红芳,汪龙德,秦晓民;前列腺素E_1对大鼠胃窦肌电活动的影响[J];动物学研究;1998年06期
9 武建亮;乔利英;刘文忠;;绵羊β3肾上腺素能受体蛋白结构和分子进化分析[J];中国畜牧杂志;2011年11期
10 张玉泉;庄跃民;张钦逊;;生猪瘦肉精残留治理工作建议[J];福建农业;2008年04期
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1 宋瑾;郑丽飞;冯小燕;王倩;李晓峰;张悦;朱进霞;;β3肾上腺素能受体在胃体的表达及在调节胃动力中的作用[A];中国生理学会消化内分泌生殖代谢生理专业委员会2011年消化内分泌生殖学术会议论文摘要汇编[C];2011年
2 刘玥;李葆明;;α_(2A)-肾上腺素能受体在大鼠小脑的细胞分布[A];中国生理学会第八届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2009年
3 谢荣盛;富路;曹君娴;朱立群;韩颖;李佳;高倩萍;;p2肾上腺素能受体在心肌梗死大鼠离体心脏机械电反馈中的作用及机制[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年
4 武建军;沈洪;张颖丽;颜光涛;王成斌;;大鼠缺氧、缺血时α_1和β肾上腺素能受体和NO的变化[A];中华医学会急诊医学分会复苏、灾害、中毒专业联合学术交流会资料汇编[C];1999年
5 杨焕芍;;罕见静脉注射肾上腺素他杀一例[A];第四次全国法医学术交流会论文集(上卷)[C];1991年
6 刘华;章艳菊;倪松石;;RhoGDI2调控beta-2肾上腺素能受体下调机制的研究[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
7 马秀瑞;王敬萍;刘慧荣;;抗β_3肾上腺素能受体自身抗体对心衰大鼠心脏的保护作用[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
8 武建军;李利华;张颖丽;颜光涛;;大鼠心跳骤停期间心脏和肾脏α_1-肾上腺素能受体的变化[A];中华医学会急诊医学学会第六次全国急诊医学学术会议论文汇编[C];1996年
9 骆秦;李南方;周玲;李涛;王新玲;祖菲亚;张德莲;常桂娟;周克明;洪静;;β_2肾上腺素能受体基因Arg16/Gly多态性与新疆哈萨克族男性甘油三酯水平的关系[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
10 王瑾;李美霞;刘慧荣;;扩张型心肌病患者β_3肾上腺素能受体自身抗体的分布及特性[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 孟庆义;剂量反复变化 认识不断深入[N];中国医药报;2008年
2 成吉;小心驶得万年船[N];医药经济报;2007年
3 南昌大学医学院第二附属医院心内科 教授 苏海;α_(1)-肾上腺素能受体阻滞剂如何降压[N];家庭医生报;2007年
4 张纬洪;前列腺增生的用药[N];医药养生保健报;2007年
5 白雄;危险的抢救[N];农村医药报(汉);2008年
6 衣晓峰 钱锐;久咳不愈当心哮喘[N];健康报;2005年
7 ;鼻炎常用药物大观[N];医药导报;2005年
8 龙安民;十种药不宜突然停用[N];大众卫生报;2006年
9 ;中毒的治疗[N];农村医药报(汉);2006年
10 北京伊美尔健翔医院执业药师 陶晨;开角型青光眼药物治疗[N];医药养生保健报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚香兰;缺氧性肺动脉高压发病机理的细胞、分子机制探讨[D];中国协和医科大学;1994年
2 刘国清;麻黄汤组成原理研究[D];第一军医大学;2005年
3 张桦;缺氧性肺动脉高压发病的分子机制研究肾上腺素能受体基因转录活性的变化[D];中国协和医科大学;1996年
4 郭红阳;山羊应激性心律失常发生的自主神经机制[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
5 刘真;促生长激素神经肽在感觉和交感神经节的表达及有关的痛觉调节机制[D];山东大学;2008年
6 李刚;人逼尿肌细胞肾上腺素能β_3受体基因亚型细胞的培养及干预性实验[D];中国医科大学;2007年
7 张慧敏;糖皮质激素对心力衰竭大鼠心肌肾上腺素能受体密度及血流动力学的影响[D];河北医科大学;2009年
8 鲁彦;内皮素-1_(1-31)的心血管效应及其机制研究[D];第二军医大学;2005年
9 李书国;慢性心力衰竭大鼠的心脏交感神经重构及Carvedilol的保护作用研究[D];华中科技大学;2007年
10 张海锋;中国太仓地区及西欧弗拉芒人群高血压流行病学研究[D];南京医科大学;2006年
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1 张蕾;汉族、维吾尔族婴幼儿毛细支气管炎与β_2肾上腺素能受体基因多态性的关系研究[D];新疆医科大学;2012年
2 徐宁;BPH性BOO膀胱平滑肌β肾上腺素能受体表达的变化[D];大连医科大学;2004年
3 徐翼;沙丁胺醇诱导β_2肾上腺素能受体下调细胞水平的研究[D];南通大学;2010年
4 王艳洁;去甲肾上腺素对培养的背根神经节神经元P物质释放的调节作用[D];山东大学;2012年
5 朱翠翠;β3肾上腺素能受体基因及瘦素基因多态性与新疆哈萨克族儿童肥胖的关系[D];新疆医科大学;2013年
6 贾晋荣;小儿择期手术前后血浆醛固酮、肾上腺素的变化及分析[D];山西医科大学;2009年
7 高燕;抗β_1受体自身抗体对培养心肌细胞的致凋亡作用[D];山西医科大学;2002年
8 宋晓华;β1受体反义寡核苷酸对肾性高血压鼠的干预研究[D];武汉大学;2005年
9 秦石;胆碱能受体和肾上腺素能受体磷酸化的调节作用机制研究[D];吉林大学;2008年
10 荣箭;肿瘤坏死因子-α对原代培养大鼠心肌细胞β3-肾上腺素能受体表达的影响及机制研究[D];中国医科大学;2010年
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